IDH1突變通過EMT促進(jìn)膠質(zhì)瘤惡性行為的初步研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤(Glioma)作為最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，至今仍是人類未攻克的、并嚴(yán)重危害人類健康及生存質(zhì)量的疾病。根據(jù)其組織病理學(xué)特征，世界衛(wèi)生組織(WHO)也將中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)，而隨著目前對(duì)膠質(zhì)瘤研究的進(jìn)一步深入，傳統(tǒng)的組織病理學(xué)分類并不能解釋許多特征性的臨床現(xiàn)象，也與不斷進(jìn)展的分子基因水平研究顯示出了在臨床治療及預(yù)后指導(dǎo)方面的不足，在有關(guān)膠質(zhì)瘤的分子基因研究中，異檸檬酸脫氫酶基因(IsocitrateDehydroge

2、nase Gene，IDH)突變顯示出了極大的臨床指導(dǎo)意義，也值得更加深入的研究。IDH突變的研究由2008年P(guān)arsons等利用高通量測(cè)序技術(shù)而發(fā)現(xiàn)的;2009年Dang，L主導(dǎo)的研究提出，并實(shí)驗(yàn)證明IDH突變能夠?qū)е麓侔┐x物2-羥基戊二酸(2-hydroxyglutamte，2-HG)的積聚，而高水平的2-HG能夠在體內(nèi)促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和惡性進(jìn)展。多數(shù)研究者對(duì)IDH突變的研究多集中在293T細(xì)胞等細(xì)胞系及膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，臨床數(shù)

3、據(jù)提示IDH突變較多發(fā)生在較低級(jí)別膠質(zhì)瘤(＞80％)，加之細(xì)胞系與臨床的距離，本研究應(yīng)用較低級(jí)別膠質(zhì)瘤原代細(xì)胞的研究顯得頗有意義。
　　IDH基因產(chǎn)生異檸檬酸脫氫酶(Isocitrate Dehydrogenase)，在生理水平下根據(jù)分布的不同部位可以分為IDH1、IDH2和IDH3三個(gè)亞型，IDH1位于細(xì)胞質(zhì)，IDH2和IDH3位于線粒體，其功能基本一致，因此IDH1即能反應(yīng)IDH的特征且更具有代表性。2-HG作為IDH突變產(chǎn)生

4、的促癌代謝物，由于其與IDH突變的緊密關(guān)系也成為了被研究的重要靶點(diǎn)。已有的研究發(fā)現(xiàn)IDH1突變后，細(xì)胞基因組和組蛋白發(fā)生超甲基化，因而細(xì)胞分化受到抑制，還有研究證明IDH1突變以及外源性2-HG的作用使上皮細(xì)胞發(fā)生間質(zhì)變，而這些都未曾在膠質(zhì)瘤，特別是較低級(jí)別膠質(zhì)瘤中得到驗(yàn)證，而且IDH1突變對(duì)腫瘤的促進(jìn)作用也無法解釋IDH突變型膠質(zhì)瘤的良好預(yù)后，甚至與之相背。本次研究目的在探討異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)及其代謝產(chǎn)物2-羥基戊二酸(2-

5、hydroxyglutarate，2-HG)對(duì)膠質(zhì)瘤增殖、遷移等惡性行為的作用機(jī)制。已有研究證明在正常乳腺上皮細(xì)胞以及大腸癌細(xì)胞中，IDH突變能夠通過上皮細(xì)胞間質(zhì)變(EMT)影響腫瘤細(xì)胞的形態(tài)和功能，而在膠質(zhì)瘤中尚未有研究證明這一機(jī)制。本文所示研究通過進(jìn)行原代和細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)得到實(shí)驗(yàn)對(duì)象，細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（CCK-8）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的mRNA表達(dá)。實(shí)