CMO啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)CMO基因提高轉(zhuǎn)基因Micro-Tom耐鹽性.pdf

1、在植物抗逆基因工程中，組成型啟動(dòng)子已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，雖然組成型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因表達(dá)可以提高轉(zhuǎn)基因植物的抗逆性，但會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)遲緩甚至不育。應(yīng)用脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子就可以解決這個(gè)問(wèn)題。
　　 膽堿單加氧酶(choline monooxygenase，CMO)是合成甜菜堿的關(guān)鍵酶，其啟動(dòng)子(pC5：-267～+1bp)是鹽誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。本研究用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法分別將pC5-CMO和CaMV35S-CMO轉(zhuǎn)入Micro-To

2、m(Solanum lycopersicum L.cv.Micro-Tom)中，對(duì)兩種轉(zhuǎn)基因Micro-Tom中CMO基因拷貝數(shù)、CMO基因表達(dá)、轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性及生長(zhǎng)狀況進(jìn)行分析。主要結(jié)果如下：
　　 1、通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法成功獲得了pC5-CMO、CaMV35S-CMO轉(zhuǎn)基因Micro-Tom，通過(guò)對(duì)這些轉(zhuǎn)基因植株中外源CMO基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，獲得了單拷貝及低拷貝的轉(zhuǎn)基因植株。
　　 2、利用熒光定量PCR法對(duì)單拷貝

3、的轉(zhuǎn)基因植株中外源CMO基因的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在正常條件下pc5-CMO轉(zhuǎn)基因植株中CMO基因表達(dá)量低于CaMV35S-CMO轉(zhuǎn)基因植株，而在200 mmol/L NaCl脅迫處理48 h后，pC5-CMO轉(zhuǎn)基因植株中CMO基因表達(dá)量增加6.7倍，CaMV35S-CMO轉(zhuǎn)基因植株中CMO基因依然過(guò)量表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　 3、200 mmol/L NaCl脅迫處理野生和轉(zhuǎn)基因Micro-Tom一周后，野生Micro-T

4、om幾乎死亡，轉(zhuǎn)基因Micro-Tom生長(zhǎng)正常。轉(zhuǎn)pC5-CMO、CaMV35s-CMO基因提高了Micro-Tom的抗鹽性。
　　 4、CaMV35S-CMO轉(zhuǎn)基因Micro-Tom均表現(xiàn)出株型矮小、生長(zhǎng)遲緩、產(chǎn)量下降、落花等現(xiàn)象，pc5-CMO轉(zhuǎn)基因Micro-Tom的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、開(kāi)花和產(chǎn)量基本和野生Micro-Tom相同。
　　 5、獲得了既抗鹽、又能正常生長(zhǎng)的pc5-CMO，轉(zhuǎn)基因Micro-Tom；pC5-CMO