基于脂肪干細(xì)胞可注射組織工程骨的構(gòu)建與骨不連修復(fù).pdf

1、目的：
　　脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ASCs）因具有良好的成骨分化潛能而常被用作骨組織工程種子細(xì)胞。本研究將小鼠ASCs接種于聚谷氨酸芐酯（Polyγ-benzyl-L-glutamate，PBLG）微球，進(jìn)行成骨誘導(dǎo)后，局部注射干預(yù)小鼠股骨骨不連模型。觀察由ASCs與PBLG微球構(gòu)建的可注射性組織工程骨，對(duì)小鼠股骨骨不連的修復(fù)作用，為骨不連的臨床治療探索新的途徑。
　　方法：

2、>　　取第三代小鼠ASCs，約以1×107ASCs混合60mgPBLG進(jìn)行成骨誘導(dǎo)；
　?。?）DiO熒光標(biāo)記、電鏡掃描觀察ASCs在PBLG上的粘附、增殖情況。
　?。?）以未誘導(dǎo)組作為對(duì)照，定性和定量方法分別檢測(cè)堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、細(xì)胞外鈣鹽沉積情況。
　?。?）于C57小鼠股骨中部造成2mm骨缺損，分別以髓內(nèi)釘、髓內(nèi)釘聯(lián)合“U”型夾的方法進(jìn)行固定；模型建立后12周通過(guò)X

3、線(xiàn)、microCT與組織學(xué)檢查，觀察骨不連模型形成情況。
　　（4）將ASCs/PBLG組織工程骨0.1ml局部注射于鼠股骨骨不連處（n=5）；單純注射PBLG微球0.1ml（n=5）、PBS0.1ml（n=5)分別作為對(duì)照組，通過(guò)X線(xiàn)、microCT及組織學(xué)等方法觀察骨不連修復(fù)情況。
　　結(jié)果：
　　（1）體外成骨誘導(dǎo)14天，DiO熒光標(biāo)記證明細(xì)胞在微載體內(nèi)生長(zhǎng)良好，掃描電鏡觀察到微載體表面細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。與未成骨

4、誘導(dǎo)組相比，成骨誘導(dǎo)后10-14天成骨指標(biāo)ALP及Ca離子顯著增高。
　?。?）建立2mm小鼠股骨骨缺損，單純以髓內(nèi)針固定，骨缺損術(shù)后12周骨不連形成率為60％；加用“U”型夾術(shù)后12周全部形成骨不連，骨缺損間隙無(wú)短縮。
　?。?）選用髓內(nèi)針/“U”型夾固定的小鼠骨不連模型，局部注射負(fù)載成骨誘導(dǎo)ASCs的PBLG微球，8周后X片顯示ASCs/PBLG組骨缺損處雙側(cè)均有骨性骨痂相連，MicroCT顯示骨缺損處骨性連接，組織學(xué)切