大彈涂魚褪黑素受體的研究.pdf

1、大彈涂魚(Boleophthalmus pectinirostris)生活于潮間帶灘涂，營洞穴生活，是我國東南沿海的名特優(yōu)養(yǎng)殖魚類。前期的研究結果表明，繁殖季節(jié)大彈涂魚生殖群體呈現出有規(guī)律的半月周期產卵現象，血清中的類固醇激素和褪黑素也呈明顯的半月周期變化。為了進一步了解大彈涂魚褪黑素和半月周期產卵習性的關系，本文采用分子生物學等方法克隆了大彈涂魚四種褪黑素受體亞型基因（mtnr1a1.4、mtnr1a1.7、mtnr1b和mtnr1c

2、），并研究了其在不同組織的表達。主要結果如下:
　　 1.mtnr1a1.4基因的部分片段長度為1471 bp，蛋白質編碼區(qū)可編碼246個氨基酸，其中3'-UTR為728 bp; mtnr1a1.7基因全長為1501 bp，編碼一個由351個氨基酸組成的蛋白質，5'端有一個310 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個138 bp的非編碼區(qū);mtnr1b基因全長為2074 bp，有一個長1203 bp的開放閱讀框，5'端有一個787 bp

3、的非編碼區(qū)，3'端有一個84 bp的非編碼區(qū)，編碼一個由400個氨基酸組成的蛋白質;mtnr1c基因全長為1615 bp，有一個長1080 bp的開放閱讀框，編碼一個由359個氨基酸組成的蛋白質，5'端有一個260 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個275 bp的非編碼區(qū)。
　　 2.蛋白質結構預測顯示，四種受體亞型均是具有七次跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體;對已知的脊椎動物褪黑素受體亞型建樹分析進一步證實，從大彈涂魚克隆所得的四個受體亞型分

4、別屬于Mtnr1a1.4，Mtnr1a1.7，Mtnr1b和Mtnr1c亞型。
　　 3.采用實時熒光定量方法分析，結果顯示褪黑素受體的四個亞型廣泛分布于大彈涂魚成魚的不同組織。在腦組織和視網膜，褪黑素受體基因的表達量顯著高于其它組織，并且在視頂蓋和中腦區(qū)域具有最高的表達量。在大彈涂魚雌魚的HPG軸中，四種褪黑素受體亞型在間腦和垂體均有分布，而在卵巢組織，只有mtnr1a1.4，mtnr1a1.7和mtnr1b表達。
　　

5、 4.繁殖季節(jié)大彈涂魚腦組織中的aanat2基因，間腦的mtnr1a1.4基因，以及卵巢中的mtnr1a1.7基因具有明顯的半月周期變化節(jié)律，即1個月有2個周期，每個周期均出現1個峰值。第1個峰值出現在上弦月附近，第2次峰值出現在下弦月附近，并且峰值出現的時間與大彈涂魚產卵時間一致。大彈涂魚發(fā)育成熟的卵母細胞中，在完全分離的濾泡膜和卵細胞上僅檢測到mtnr1a1.7基因的表達。
　　 5.夜間大彈涂魚腦組織褪黑素受體亞型mtn

6、r1a1.4的表達量顯著高于白天，但是在視網膜組織沒有觀察到mtnr1a1.4基因有明顯的周日變化。而腦組織和視網膜中的mtnr1a1.7和mtnr1b兩個基因，其周日表達量均呈現出下午顯著高于夜間和早上。mtnr1c基因在腦組織的周日表達具有兩個峰值，分別出現在凌晨3點和白天12點;而視網膜中mtnr1c則無明顯的周日表達變化。
　　 綜上所述表明，褪黑素及其受體可能是大彈涂魚半月周期產卵節(jié)律的關鍵因子，它通過作用于HPG軸或