牛睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生與生長(zhǎng)期毛乳頭cDNA文庫(kù)構(gòu)建.pdf

1、毛囊是生長(zhǎng)毛發(fā)的動(dòng)態(tài)器官，由多種分化程度不同的表皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成。毛乳頭是特化的間充質(zhì)細(xì)胞，在毛囊的形態(tài)發(fā)生及周期性生長(zhǎng)調(diào)控中起著重要作用，是“毛囊周期鐘”的“中心振蕩器”。Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)誘導(dǎo)毛囊的形態(tài)發(fā)生、維持毛囊周期中干細(xì)胞增殖分化至關(guān)重要。睫毛毛囊是一種特殊的毛囊，其生長(zhǎng)期較短而休眠期極長(zhǎng)，因此睫毛生長(zhǎng)緩慢。睫毛的直徑是由其毛乳頭決定的。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)睫毛毛囊發(fā)育及周期調(diào)控機(jī)制的研究報(bào)道極少，幾乎屬于空

2、白。研究睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生及其毛乳頭在周期調(diào)控中的作用機(jī)制不僅對(duì)闡明上皮一間充質(zhì)相互作用的分子機(jī)制具有重要的理論意義，而且對(duì)了解組織器官發(fā)育和再生具有普遍的指導(dǎo)意義。 本試驗(yàn)以胎牛作為試驗(yàn)材料，通過對(duì)牛胚胎上眼瞼組織石蠟切片進(jìn)行β-catenin的免疫組化染色，定性檢測(cè)了β-catenin在各胚齡胎牛睫毛毛囊中的表達(dá)，初步研究了牛睫毛毛囊形態(tài)發(fā)生的組織學(xué)變化與β-catenin的表達(dá)變化規(guī)律；同時(shí)還構(gòu)建了新生荷斯坦牛睫毛毛囊生長(zhǎng)

3、期毛乳頭cDNA表達(dá)文庫(kù)。結(jié)果和結(jié)論如下： 1．牛睫毛毛囊的形態(tài)發(fā)生過程與相鄰的非睫毛毛囊相似，但基板和毛芽出現(xiàn)的時(shí)間較早?；搴兔坑谂啐g12～14周出現(xiàn)；毛釘出現(xiàn)于14～16周并于16～20周進(jìn)一步分化；24～28周毛囊完全成熟。成熟睫毛毛囊的毛乳頭直徑較大，附屬結(jié)構(gòu)皮脂腺極為發(fā)達(dá)。 2．β-catenin的表達(dá)變化提示其在牛睫毛毛囊基板的形成以及毛囊干細(xì)胞的分化等過程中具有重要作用。β-catenin在毛囊發(fā)育早期

4、(12～14周)和中期(14～20周)表達(dá)于睫毛毛基、毛芽和毛釘中，其中在隆突區(qū)及毛母質(zhì)中強(qiáng)表達(dá)；毛囊發(fā)育晚期(20～24周)及成熟期(24～28周)于隆突區(qū)、內(nèi)外根鞘近隆突區(qū)強(qiáng)表達(dá)，而在毛母質(zhì)中表達(dá)減弱。 3．首次成功構(gòu)建新生荷斯坦牛睫毛毛囊生長(zhǎng)期毛乳頭cDNA表達(dá)文庫(kù)。經(jīng)檢測(cè)，所構(gòu)建初級(jí)文庫(kù)滴度為2．3×10<'5>pfu/mL，重組率為95％；擴(kuò)增文庫(kù)滴度為3．3×lO<'7>pfia6nL。文庫(kù)滴度>10<'5>pfu/