甜菊苷的定向轉(zhuǎn)化及產(chǎn)物甜茶苷的分離純化.pdf

1、甜菊糖是從甜葉菊(Stevia rebaudiana bertoni)中提取的一種天然甜味劑,主要成分為甜菊苷(SS)和萊鮑迪甙A(RA)。甜茶苷(RS)是從高山植物甜茶中提取出來(lái)的天然甜味劑,產(chǎn)量低且受地域條件的限制,如果能用生物轉(zhuǎn)化的方法將SS轉(zhuǎn)化為RS,可為RS的生產(chǎn)提供全新的方法,減少因種植甜茶而帶來(lái)的山地生態(tài)破壞。
　　 本工作篩選了一株能特異性轉(zhuǎn)化甜菊苷為甜茶苷的細(xì)菌。結(jié)合菌體、菌落的形態(tài)特征及16S rDNA序列鑒

2、定,確定其為黃桿菌(Chryseobacterium sp.,專利保藏號(hào)為CCTCC NO:M209202)。該菌能專一性對(duì)SS進(jìn)行轉(zhuǎn)化,而不作用于甜菊糖中的其他成分。
　　 經(jīng)單因素試驗(yàn),優(yōu)化了該菌的培養(yǎng)條件,結(jié)果表明,木薯淀粉1％,蛋白胨1％,K2HPO40.5％,KH2PO40.5％,NaCl0.2％,硫酸鎂0.04％是適宜的培養(yǎng)基成分,在pH7.0,37℃,50 mL/250mL,接種量10％的條件下,48 h可將10

3、mg/mL甜菊糖溶液中的甜菊苷(7.2 mg/mL)完全轉(zhuǎn)化。
　　 該菌所產(chǎn)酶為胞內(nèi)酶,采用高壓破壁,在45℃,pH值7.0,底物濃度10 mg/mL的條件下,12 h甜菊苷的轉(zhuǎn)化率為95％,15 h可完全轉(zhuǎn)化。用不同的表面活性劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破壁,當(dāng)SDS添加量0.2％,12h轉(zhuǎn)化率為90％,CTAB添加量1％時(shí),12h轉(zhuǎn)化率為74％,Triton-100添加2％,12 h轉(zhuǎn)化率達(dá)到100％。
　　 以海藻酸鈉為包埋材料