肺炎克雷伯菌噬菌體的分離和生物學特性分析及體外殺菌實驗.pdf

1、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumonia，KPN)為臨床常見革蘭氏陰性桿菌，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)克雷伯菌屬(klebsiella)。該菌廣泛分布于自然界，近年來成為僅次于大腸桿菌的最重要的條件致病菌，嚴重地危害著人類的健康和生命。 噬菌體(Bacteriophage)是細菌的病毒，它與宿主菌關系密切。一方面，溶原性噬菌體通過自身攜帶的外源性遺傳物質改變宿主菌的生物學性狀，同時，在與宿主

2、菌基因組不斷的重組、整合、轉座和切離過程中彼此交換遺傳物質，影響宿主菌及自身基因的多樣性。另一方面，裂解性噬菌體能特異性裂解宿主菌，如果誘導前噬菌體進入裂解性生長周期也可導致細菌裂解，噬菌體有望發(fā)展成為抗細菌感染的生物制劑。不斷分離新的噬菌體和描述其基本的生物學特性是噬菌體研究人員的首要任務。 本研究以臨床分離的肺炎克雷伯菌肺炎亞種為宿主菌，從處理前污水中成功分離出肺炎克雷伯菌的噬菌體，并對其基本的生物學特性進行了描述，最后對其

3、體外殺菌能力進行了評估。本研究主要的研究內容及實驗結果包括以下幾個方面： 1.以肺炎克雷伯菌臨床分離株為宿主菌，從醫(yī)院污水處理站處理前污水中成分離出肺炎克雷伯菌噬菌體一株，并命名為KPNP1。噬菌體：KPNP1形成的噬斑較大，圓形，直徑約4～7mm，透明，表現為裂解性噬菌體的噬斑特征，滴度測定其滴度為6.1×1011PFU/ml。電鏡下可見噬菌體KPNP1有一個多面體立體對稱的頭部，頭部直徑約為180nm，無囊膜，有一長尾，尾長

4、約210nm，尾寬約30nm，屬于長尾噬菌體科。 2.感染復數(multiplicityofinfection，MOI)是指噬菌體感染宿主菌時噬菌體數量與宿主菌數量的比值，也稱感染倍數。最佳感染復數是噬菌體與宿主菌作用所能產生最佳效果時噬菌體數量與宿主菌數量的比值，本實驗KPNP1感染其宿主的最佳感染復數為4。 3.一步生長實驗表明：KPNP1在37℃溫育條件下，15min內吸附宿主菌的百分率為72％。感染宿主菌的潛伏期

5、約為35min，裂解期約為40min，裂解量為94PFU/cell。 4.絲裂酶素C誘導法和紫外線誘導法處理可疑溶原性細菌后均不能形成噬斑，說明KPNP1為非溶原性噬菌體，而是裂解性噬菌體。 5.KPNP1的宿主譜比較窄，僅對少量(1/30)肺炎克雷伯菌肺炎亞種敏感，對部分大腸埃希菌也敏感。 6.體外殺菌試驗表明KPNP1對KPN懸液的殺菌作用明顯，噬菌體濃度在1.8×1010PFU/ml時，反應達100分鐘時的

6、殺滅有效率為81.1％，噬菌體濃度在1.8×109PFU/ml時，反應達100分鐘時的殺滅有效率為82.3％，而低濃度噬菌體液隨著時間的延長也能達到相同的殺菌效果。 7.以泌尿管外科常用硅橡膠導尿管為材料，成功構建出耐藥KPN的生物膜，并對形成的生物膜用KPNP1處理2小時，結果表明：KPNP1對導尿管KPN生物膜的殺菌作用較明顯，殺菌有效率為71.8％，電鏡觀察也顯示KPNP1作用前導尿管上KPN細菌生長旺盛，細菌聚團生長現象