利用畢赤酵母表達小C肽人胰島素原的研究.pdf

1、胰島素（Insulin）是臨床治療糖尿病的特效藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。重組人胰島素基因曾被成功地在大腸桿菌(Escherichia coli)和釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中的表達，但是存在著難以復性和表達量較低等缺點。畢赤酵母（Pichia pastoris）具有嚴格調(diào)控外源蛋白的表達、加工修飾表達產(chǎn)物、表達量高、營養(yǎng)要求低等優(yōu)點成為表達外源蛋白的理想表達系統(tǒng)。 本研究根據(jù)植物偏愛密碼子化學合成

2、了小C 肽人胰島素原全基因（B-(H)6LQPK-A），將該小C 肽人胰島素原基因（BC’A）插入到酵母表達載體pPICZaA中，經(jīng)線性化后，電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，利用PCR篩選出了陽性轉(zhuǎn)化菌株，從而成功構(gòu)建了人胰島素原的畢赤酵母表達體系。陽性菌株經(jīng)甲醇誘導培養(yǎng)，發(fā)酵液上清液經(jīng)Tricine-SDS-PAGE 分析和Western blot 鑒定，發(fā)現(xiàn)3 株菌株（1＃，13＃，20＃）成功表達了人胰島素原，同時研究了20＃菌株的