烏司他丁對Maastricht-Ⅱ型心臟死亡器官捐獻(xiàn)供肝熱缺血損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分 大鼠Maastricht-Ⅱ型心臟死亡器官捐獻(xiàn)模型的建立及其供肝熱缺血損傷安全時(shí)限的實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的：建立一種穩(wěn)定的大鼠Maastricht-Ⅱ型DCD模型。探討不同功能性熱缺血時(shí)間，大鼠M-Ⅱ類DCD供肝肝臟質(zhì)量評估情況，確定M-Ⅱ型DCD供肝熱缺血損傷的安全時(shí)限，為M-Ⅱ型DCD供肝熱缺血損傷的藥物預(yù)處理研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：選取SD大鼠50只，以靜脈推注氯化鉀

2、的方法誘導(dǎo)心博驟停，隨后立即開始心肺復(fù)蘇并維持15min，但最終心肺復(fù)蘇失敗，觀察5min時(shí)間之內(nèi)無心電活動及自主呼吸，宣布M-Ⅱ型DCD模型建立成功。根據(jù)不同的功能性熱缺血時(shí)間，將M-Ⅱ組及假手術(shù)對照組大鼠隨機(jī)分別分為5組：功能性熱缺血時(shí)間0min（W0）、功能性熱缺血20min（W20）、功能性熱缺血30min（W30）、功能性熱缺血45min（W45）、功能性熱缺血60min（W60）五組。假手術(shù)對照組，實(shí)施假手術(shù)，僅開腹游離肝周

3、韌帶，獲取靜脈血及肝臟標(biāo)本，靜脈推注氯化鉀誘導(dǎo)心搏驟停，不進(jìn)行心肺復(fù)蘇。記錄模型建立過程中平均動脈壓（MAP）變化情況。M-Ⅱ組和假手術(shù)對照組在功能性熱缺血0min、20min、30min、45min、60min五個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲取靜脈血及肝臟標(biāo)本，觀察肝功能ALT、AST，炎癥因子TNF-ɑ、IL-6，肝臟組織HE染色結(jié)構(gòu)變化情況。所有數(shù)據(jù)使用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.靜脈推注氯化

4、鉀，繼而給予心肺復(fù)蘇最終心肺復(fù)蘇失敗的方法可以建立一種穩(wěn)定的Maastricht-Ⅱ型心臟死亡捐獻(xiàn)低血壓模型，30只大鼠中2例復(fù)蘇過程中出現(xiàn)自主心律恢復(fù)，靜脈推注氯化鉀后再次出現(xiàn)室顫，其后無自主心律恢復(fù)，造模成功率100％。2.在建立Maastricht-Ⅱ型DCD器官捐獻(xiàn)模型過程中，平均動脈壓(MAP)短暫升高之后，迅速降至30mmHg以下，直至心肺復(fù)蘇結(jié)束。3.假手術(shù)對照組及M-Ⅱ組大鼠隨功能性熱缺血時(shí)間延長血清ALT、AST、TN

5、F-ɑ、IL-6水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；M-Ⅱ組大鼠W20min、W30min、W45min、W60min四個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清ALT、AST、TNF-ɑ、IL-6水平低于假手術(shù)對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。4.隨著供肝功能性熱缺血時(shí)間的延長，各組大鼠肝臟損傷呈逐漸惡化趨勢。功能性熱缺血時(shí)間小于30min以內(nèi)時(shí)，肝臟結(jié)構(gòu)尚屬可逆性改變，肝細(xì)胞逐漸出現(xiàn)水樣變，胞漿淡染，肝索斷裂，肝竇輕微受壓，匯管區(qū)開始出現(xiàn)炎細(xì)

6、胞浸潤，未見肝細(xì)胞明顯變性壞死；功能性熱缺血時(shí)間大于30min以后，肝臟損害愈發(fā)嚴(yán)重，呈不可逆性改變，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，匯管區(qū)大量炎細(xì)胞浸潤，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性壞死逐漸加重。供肝功能性熱缺血相同時(shí)間點(diǎn)上，M-Ⅱ組肝臟損傷明顯低于假手術(shù)對照組大鼠。
　　結(jié)論：1.大鼠M-Ⅱ型DCD模型是一種用于研究DCD供肝相關(guān)研究的穩(wěn)定性和可靠性較佳的動物模型。2.隨著M-Ⅱ型DCD供肝熱缺血時(shí)間的延長，供肝質(zhì)量損害呈逐漸惡化的趨勢。3.M-Ⅱ型DCD

7、供肝耐受功能性熱缺血損傷的安全時(shí)限約為30分鐘。4.供肝功能性熱缺血損傷30min的DCD模型可以作為研究DCD供體藥物預(yù)處理的理想動物模型。
　　第二部分 烏司他丁預(yù)處理對大鼠M-Ⅱ型DCD器官捐獻(xiàn)供肝熱缺血損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：明確烏司他丁預(yù)處理對大鼠M-Ⅱ型DCD供肝熱缺血損傷影響并對其作用機(jī)制作初步探討。
　　方法：實(shí)驗(yàn)動物及手術(shù)方法同第一部分。根據(jù)供肝功能性熱缺血時(shí)間以及術(shù)后不同處理，將30只大鼠

8、隨機(jī)分為生理鹽水對照組(NS組)及烏司他丁預(yù)處理組（U組）：生理鹽水組(NS組)術(shù)前3天通過股靜脈留置管注射0.9%氯化鈉(2ml/kg/d)，烏司他丁預(yù)處理組（U組）術(shù)前3天通過股靜脈留置管注射烏司他丁注射液(100kU/kg/d)。于供肝功能性熱缺血20min、30min、45min（絕對熱缺血0min、10min、25min）時(shí)間點(diǎn)獲取靜脈血及肝臟標(biāo)本。觀察肝功能ALT、AST，炎癥因子TNF-ɑ、IL-6，肝臟組織HE染色結(jié)構(gòu)變

9、化情況。
　　結(jié)果：1.生理鹽水對照組(NS組)及烏司他丁預(yù)處理組（U組）大鼠隨功能性熱缺血時(shí)間延長血清ALT、AST、TNF-ɑ、IL-6水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；烏司他丁預(yù)處理組（U組）大鼠W20min、W30min、W45min三個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清ALT、AST、TNF-ɑ、IL-6水平低于生理鹽水對照組(NS組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2.烏司他丁預(yù)處理組（U組）和生理鹽水對照組（NS組）大鼠供

10、肝隨著功能性熱缺血時(shí)間的延長肝臟損傷呈逐漸惡化趨勢，同時(shí)，同一時(shí)間點(diǎn)烏司他丁預(yù)處理組肝臟損害較生理鹽水對照組損害相對輕。功能性熱缺血時(shí)間20min時(shí)，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，偶發(fā)少量炎細(xì)胞浸潤，肝竇結(jié)構(gòu)尚正常，且烏司他丁預(yù)處理組（U20組）較生理鹽水對照組（NS20組）肝臟結(jié)構(gòu)更為清晰。功能性熱缺血時(shí)間30min時(shí)，肝臟結(jié)構(gòu)損害加重，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤加重，肝竇受壓明顯，且生理鹽水對照組（NS20組）肝臟損害較烏司他丁組（U30組）更為嚴(yán)重。功能