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文檔簡介
1、目的:本課題通過從人牙齦組織提取牙齦間充質(zhì)干細胞(GMSCs),鑒定其表型并比較其與骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)、脂肪間充質(zhì)干細胞(ASCs)在體內(nèi)與體外免疫調(diào)節(jié)功能的差異;分析其在體外對 B淋巴細胞增殖與分化的調(diào)節(jié)功能,并探討其相關(guān)的分子機制;同時建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并向其體內(nèi)輸注GMSCs,觀察GMSCs在體內(nèi)對慢性移植物抗宿主病的治療作用,從而為間充質(zhì)干細胞治療相關(guān)免疫疾病提供實驗依據(jù)。
方法:分別從人體組
2、織分離出GMSCs,BMSCs與ASCs,在體外培養(yǎng)擴增并鑒定其表型。將三種間充質(zhì)干細胞分別與 T細胞共培養(yǎng),加入 CD3/CD28磁珠,檢測其在體外抑制T細胞擴增的功能;NOD小鼠輸注人外周血單核細胞建立異種GVHD模型,分別從尾靜脈輸注以上三種間充質(zhì)干細胞,比較其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能。為了研究GMSCs對B細胞的調(diào)節(jié)作用,分選人B細胞,在CD40L與IL-4的作用下,與GMSCs共同培養(yǎng),以纖維組織母細胞(Fibroblast)為對照,
3、流式細胞儀檢測B細胞擴增情況,細胞因子流式分析和酶聯(lián)免疫吸附測定檢測相關(guān)因子和免疫球蛋白的表達水平以及B細胞分化為漿細胞或調(diào)節(jié)性B細胞的情況。由于B細胞能夠作為抗原提呈細胞激活T細胞的增生,將處理后的B細胞與T細胞在抗CD3抗體的作用下共培養(yǎng),檢測B細胞介導的T細胞活化與增殖的情況,最后在B細胞與牙齦間充質(zhì)干細胞的共培養(yǎng)體系中,加入多種免疫相關(guān)信號蛋白的中和抗體,探討相關(guān)分子機制。在體內(nèi)實驗中,建立人源化的小鼠慢性移植物抗宿主病模型,從
4、尾靜脈輸注 GMSCs,分析相關(guān)免疫性疾病的發(fā)展情況與嚴重度變化。
結(jié)果:我們成功在體外提取并培養(yǎng)出具有功能且表型正常的 GMSCs,它較BMSCs與ASCs有更強的免疫調(diào)節(jié)功能和體外擴增能力。GMSCs能夠在體外抑制B細胞的增殖,而這種效應不需要依賴細胞接觸就能夠?qū)崿F(xiàn);GMSCs能夠降低漿細胞的生成,促進B細胞向調(diào)節(jié)性B細胞的分化;GMSCs還能夠降低B細胞表達免疫球蛋白水平,增加其抗炎癥因子的分泌。機制研究發(fā)現(xiàn)TGF-β受
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