ACE在高血壓大鼠失血性休克后淋巴管功能變化中的作用.pdf

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，無論是在自發(fā)性高血壓大鼠模型上還是在高鹽誘導(dǎo)的繼發(fā)性高血壓大鼠模型上，亦或是兩者結(jié)合的高血壓大鼠模型上均發(fā)現(xiàn)淋巴管的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生了變化。前期研究表明，淋巴管在失血性休克發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。那么在高血壓狀態(tài)下，發(fā)生失血性休克過程中淋巴管的功能是否與正常血壓時(shí)一致，亦或有其它變化？尚未見報(bào)道。同時(shí)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑已廣泛應(yīng)用于高血壓的治療，且可以減輕失血性休克過程中血管內(nèi)皮的損傷，也參與了失

2、血性休克后多器官損傷、血管低反應(yīng)性的發(fā)生過程。那么，ACE在正常血壓或高血壓發(fā)生過程中是否與淋巴管功能的變化存在一定的關(guān)系，值得研究。
　　為此，在建立兩腎一夾(2K1C)高血壓大鼠模型的基礎(chǔ)上，本研究通過運(yùn)用ACE抑制劑依那普利(Enalapril)作為干預(yù)因素，觀察ACE在正常血壓、高血壓大鼠失血性休克后活體腸系膜淋巴管收縮性以及離體腸系膜淋巴管的收縮性及其對(duì)P物質(zhì)(SP)反應(yīng)性變化中的作用與表達(dá)的變化，從而揭示ACE在正常血

3、壓、高血壓大鼠失血性休克后淋巴管功能變化中的作用及其差異性，為針對(duì)ACE，從調(diào)控淋巴管功能的角度改善正常血壓、高血壓患者失血性休克的預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　首先，本實(shí)驗(yàn)制備2K1C高血壓大鼠模型:雄性健康Wistar大鼠，體重為200±10g，經(jīng)過適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)均分為假手術(shù)組(僅進(jìn)行麻醉和腎動(dòng)、靜脈分離，sham)、高血壓組（采用平行針灸針縮窄法進(jìn)行左側(cè)腎動(dòng)脈夾閉，2K1C）、假手術(shù)+依那普利組（僅進(jìn)行麻醉和腎動(dòng)、靜脈分離，并

4、在術(shù)后4周給予依那普利10mg/kg/d，溶于飲用水中喂食4周）、高血壓+依那普利組（建立2K1C高血壓大鼠模型后，在術(shù)后4周予以依那普利10mg/kg/d，溶于飲用水中喂食4周）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2K1C術(shù)后，大鼠收縮壓顯著高于Sham組;第4周后，Enalapril治療在第6、7、8周均發(fā)揮了顯著的降壓作用。結(jié)果表明，2K1C高血壓大鼠模型建立成功，且Enalapril具有明顯的降壓作用。
　　在2K1C術(shù)后8周或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，分別將

5、上述4組中的每一組大鼠均隨機(jī)分為假手術(shù)組（執(zhí)行與失血性休克模型完全相同的手術(shù)，但不放血）與失血性休克組（常規(guī)方法建立失血性休克模型，維持低血壓40±2mmHg，1.5h后，將放出全血加等量林格氏液，進(jìn)行液體復(fù)蘇）。常規(guī)技術(shù)觀察低血壓1.5h、液體復(fù)蘇結(jié)束后3h或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的活體腸系膜淋巴管的收縮性，以收縮頻率(F)、淋巴管收縮性指數(shù)(IndexⅠ)、淋巴管總收縮分?jǐn)?shù)(IndexⅡ)、淋巴管動(dòng)力學(xué)指數(shù)(L.D-Index)三個(gè)指標(biāo)來反應(yīng)活

6、體淋巴管的收縮功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在失血性休克持續(xù)低血壓1.5h液體復(fù)蘇前及液體復(fù)蘇后3h，失血性休克顯著降低正常血壓和2K1C高血壓大鼠的腸系膜淋巴管的收縮頻率及收縮功能;2K1C高血壓大鼠較正常血壓大鼠腸系膜淋巴管的收縮頻率及收縮功能更為低下;Enalapril治療可以提高2K1C導(dǎo)致高血壓引起淋巴管收縮功能;同時(shí)，Enalapril治療可以抑制失血性休克引起大鼠腸系膜淋巴管收縮功能的降低。研究也顯示，各組大鼠在失血性休克后期，淋巴管收

7、縮功能均較休克前期顯著下降。結(jié)果提示，失血性休克及2K1C高血壓均可引起活體腸系膜淋巴管收縮性下降;而在高血壓存在的情況下，發(fā)生失血性休克發(fā)生，淋巴管收縮性下降更為嚴(yán)重，Enalapril治療可以改善這種情況。
　　隨后，在各組大鼠活體腸系膜淋巴管觀察結(jié)束后（即相當(dāng)于休克液體復(fù)蘇結(jié)束后3h）留取腸系膜淋巴管，制備離體腸系膜淋巴管環(huán)，應(yīng)用微血管壓力-直徑測量系統(tǒng)，觀察并記錄離體腸系膜淋巴管舒張末期口徑(EDD)、收縮末期口徑(ESD

8、)、收縮頻率(CF)及最大被動(dòng)舒張管徑(PD);計(jì)算泵流分?jǐn)?shù)(FPF)、緊張指數(shù)(TI)、收縮幅度(CA)，評(píng)價(jià)離體淋巴管的收縮功能，進(jìn)一步觀察Enalapril在正常血壓、高血壓大鼠失血性休克后離體淋巴管收縮性變化中的作用。然后，從低濃度到高濃度依次加入梯度的SP應(yīng)用液孵育，不同濃度的SP均孵育3min，期間分別記錄各組的ESD、EDD、CF、PD，計(jì)算FPF、TI、CA等指標(biāo)，并計(jì)算SP作用前后的CF、FPF、TI、CA的差值△CF

9、、△FPF、△TI、△CA，評(píng)價(jià)淋巴管反應(yīng)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，失血性休克可以降低正常血壓大鼠離體淋巴管的收縮性及反應(yīng)性;2K1C高血壓大鼠離體腸系膜淋巴管的收縮性與反應(yīng)性均顯著低于正常血壓大鼠，Enalapril治療可以提高2K1C高血壓引起離體淋巴管收縮性及反應(yīng)性的降低;Enalapril治療均可以改善因失血性休克引起正常血壓大鼠、高血壓大鼠離體腸系膜淋巴管的收縮性及反應(yīng)性，但在高血壓狀態(tài)情況下，失血性休克發(fā)生時(shí)，離體淋巴管CF、FPF升高

10、，而Enalapril治療后可以改善這一現(xiàn)象。
　　在留取淋巴管組織制備淋巴管環(huán)的同時(shí)，留取胸導(dǎo)管組織，常規(guī)方法制備組織切片，免疫組織化學(xué)染色方法檢測ACE表達(dá);留取腹主動(dòng)脈血，ELISA方法檢測血漿血管緊張素(Ang)Ⅱ水平。結(jié)果顯示，失血性休克引起正常血壓大鼠淋巴管組織ACE表達(dá)和血漿AngⅡ水平增高;2K1C高血壓大鼠ACE表達(dá)及血漿AngⅡ水平顯著高于正常血壓大鼠，Enalapril治療可以降低2K1C高血壓引起的這些變化

11、;同時(shí)，Enalapril治療均抑制了失血性休克引起正常血壓大鼠、高血壓大鼠ACE表達(dá)及血漿AngⅡ水平的升高。
　　為了進(jìn)一步觀察腸系膜淋巴管收縮性變化是否與腸組織學(xué)損傷有關(guān)，本文留取腸組織，制備腸組織切片，HE染色觀察腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，并測量了腸絨毛高度;同時(shí)，檢測了腸組織干濕比、血漿D-乳酸(D-LA)、腸型脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)，用以反映腸損傷程度。結(jié)果顯示，失血性休克可以引起正常血壓大鼠腸組織損傷;2K1C高血

12、壓大鼠存在一定的腸組織損傷，Enalapril治療可以減輕2K1C高血壓后的腸組織損傷;Enalapril治療均可以改善失血性休克引起正常血壓大鼠、高血壓大鼠腸組織損傷。
　　綜上，失血性休克可以引起正常血壓大鼠腸系膜淋巴管功能障礙，ACE抑制劑Enalapril可以改善失血性休克后的淋巴管功能;2K1C高血壓大鼠淋巴管的收縮功能降低，2K1C高血壓大鼠失血性休克后淋巴管功能障礙程度更為嚴(yán)重，Enalapril可以改善2K1C高血