Brg1在正常與疾病狀態(tài)下眼表組織中的表達與功能研究.pdf

1、背景:Brahma相關基因1（Brahma-related gene1，Brg1）是染色質重塑復合物SWI/SNF的ATP酶亞基之一，廣泛存在于真核細胞中。以往的研究表明，Brg1結合復合物參與不同類型細胞的細胞周期控制、凋亡和細胞分化。到目前為止，沒有關于眼表上皮細胞Brg1表達以及功能的報道。
　　方法:對小鼠、兔以及人眼表組織的Brg1表達和定位進行免疫熒光染色和蛋白質印跡檢測。人角膜上皮細胞株(HCE)，小鼠角膜上皮細胞系

2、(TKE2)，小鼠原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞(mCEC)分別在DMEM/F12+10％FBS，KSFM，和CNT-20培養(yǎng)基中培養(yǎng)。兔角膜緣上皮細胞進行克隆培養(yǎng)。采用0.9mM Ca2+，10％FBS或Brg1 siRNA處理TKE2，探討B(tài)rg1在角膜上皮細胞分化中的作用。另外，對翼狀胬肉組織的Brg1表達進行免疫熒光染色及PCR檢測。
　　結果:在小鼠出生后第0-7天，角膜上皮未見Brg1表達，第2周開始在角膜上皮基底層有少量細胞

3、表達，第3周見陽性細胞擴展至基底上層，至第4周中央角膜上皮呈全層表達。角膜緣處均無表達。Brg1在人角膜緣上皮細胞基底層無表達，而在角膜緣上層、外周和中央角膜上皮細胞全層表達。在兔角膜緣和角膜組織中，Brg1呈現(xiàn)類似的表達模式。免疫熒光染色顯示，TKE2細胞系、HCE細胞系和mCEC細胞核中均有Brg1表達，但在核中的表達分布不同。兔角膜緣上皮細胞克隆未見Brg1表達，而在原代培養(yǎng)的兔角膜緣上皮細胞和兔中央角膜上皮細胞中，Brg1均呈核

4、表達。TKE2在0.9mM Ca2+或10％FBS誘導分化后，細胞中Brg1表達水平?jīng)]有明顯改變，但在細胞核中的分布方式發(fā)生變化。TKE2細胞轉染Brg1 siRNA后，經(jīng)過實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，Brg1表達水平下降，而p63、K14等干細胞特異性蛋白表達水平增高，同時與上皮細胞分化相關的轉錄因子Klf4表達水平降低。人及兔正常結膜組織只在上皮表層有少量Brg1表達，但翼狀胬肉上皮層全層細胞高表達Brg1。
　　結論:Brg