大腸埃希氏菌K-12胞漿熱調節(jié)蛋白及其相關蛋白質復合物的研究.pdf

1、細菌適應熱環(huán)境的機制研究一直以來都是微生物學家研究的熱點，是研究細菌適應外界環(huán)境變化的機制及其進化的重要組成部分。然而前期的研究主要集中在熱激反應階段，對熱激反應過后細菌如何維持熱適應的研究還較少。為此，本論文充分利用功能蛋白質組學研究的技術和手段，對E.coli K-12維持熱適應中起調節(jié)作用的胞漿蛋白及其相關蛋白質復合物進行研究，以期了解細菌維持熱適應的調節(jié)蛋白及其蛋白調節(jié)網絡，進而深入認識細菌適應熱環(huán)境的機制。 本論文首先

2、采用基于2-D native/SDS-PAGE的蛋白質組學方法對不同溫度培養(yǎng)條件下的E.coli K-12胞漿蛋白進行了比較分析，鑒定了6個差異表達蛋白GroL、ClpB、DnaK、Mdh、MalE和LysU，并利用基因工程技術制備多克隆抗體，進而采用Western blotting技術驗證這些蛋白的表達差異。 其次，通過2-D native/SDS-PAGE技術、質譜技術和對數(shù)據(jù)庫的搜索，初步探索了6個熱調節(jié)蛋白相關的蛋白質復

3、合物，并利用His-pull down技術驗證了其中部分復合物：GroL-Tig-RpsA，DnaK-AspS和GapA-AnsB的相互作用關系。然后，利用基因敲除菌及高表達菌株初步研究了6個熱調節(jié)蛋白對E.coli K-12正常生長及高溫下生長的影響。 最后，采用2-D native/SDS-PAGE技術對6個熱調節(jié)蛋白對應的基因敲除菌在不同溫度下的蛋白表達譜進行比較分析，以研究熱調節(jié)蛋白相關的蛋白調節(jié)網絡。利用質譜技術共鑒定

4、出包括上述6個熱調節(jié)蛋白在內的36個差異表達的蛋白。它們參與細菌能量代謝，信息處理等許多重要生理活動，是細菌熱調節(jié)蛋白網絡的組成部分。這些熱調節(jié)蛋白不僅功能相關，在維持細菌熱適應中發(fā)揮一定的作用，而且通過IntAct數(shù)據(jù)庫查詢，我們發(fā)現(xiàn)其中大部分蛋白在生理上還存在著相互作用關系。 這些發(fā)現(xiàn)不僅有助于我們清楚地了解細菌維持熱適應中的熱調節(jié)蛋白及其蛋白調節(jié)網絡，進一步認識細菌適應熱環(huán)境的機制，而且對細菌適應其他環(huán)境的研究也具有重要的