HeLa細胞的RNA-16在細胞周期和藥物處理下的表達調(diào)控的研究.pdf

1、真核細胞在受到DNA損傷藥物的刺激后，細胞本身可以激活一系列的反應(yīng)機制，包括DNA修復，細胞周期的停滯和細胞凋亡等。這些反應(yīng)過程不僅有各種基因和它們的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的參與，而且也有RNA和代謝小分子的參與。MicroRNA（miRNA）是一類長度為22個核苷酸左右的非編碼RNA，對動植物細胞的蛋白質(zhì)表達起著重要的調(diào)控作用。目前，一些報道稱用紫外線或者離子照射導致的細胞DNA損傷，其細胞內(nèi)的miRNA的表達也會發(fā)生改變，進而影響到一個或多個靶

2、基因的表達水平。
　　 在本實驗室前期的研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)，用甲磺酸甲酯(MMS)處理HeLa細胞，可以導致各個時相的細胞周期進程發(fā)生阻滯。為了探討DNA甲基化試劑引發(fā)的DNA損傷是否可以影響miR-16的表達變化，我們首先研究了HeLa細胞在有MMS處理或者沒有MMS處理下的各個時相的細胞周期中miR-16的表達情況。我們的結(jié)果表明，只有在MMS處理的S時期的HeLa細胞中，miR-16的表達有明顯的升高。進一步的分子機理研

3、究表明，Cdc25A蛋白也僅僅在藥物處理的S時期細胞中下調(diào)表達。
　　 為了進一步確定miR-16和Cdc25A之間的關(guān)系，我們通過瞬時轉(zhuǎn)染miR-16的抑制劑來抑制內(nèi)源性的miR-16的表達。結(jié)果表明，抑制了MMS-誘導的miR-16的表達上調(diào)就能夠增加Cdc25A的表達；進一步證明miR-16的表達上調(diào)具備了下調(diào)其靶蛋白Cdc25A的功能。但是，用流式細胞儀分析的DNA含量的結(jié)果卻顯示，Cdc25A恢復性表達的MMS-處理的

4、細胞依然停滯在S期，表明僅僅是恢復因miR-16的表達上調(diào)導致的Cde25A蛋白表達水平，不足以消除MMS-處理引起的細胞周期停滯。
　　 上述實驗表明miRNA的表達調(diào)控具有細胞周期時相的依賴性，那么這種調(diào)控是否具有藥物的依賴性。我們用另一種DNA損傷藥物羥基脲(HU)將HeLa細胞的S期進行阻滯。分析結(jié)果顯示，miR-16和Cdc25A的含量在HU-處理引起的S期停滯的HeLa細胞中并沒有發(fā)生改變。
　　 這些數(shù)據(jù)表