復(fù)合型非病毒載體的構(gòu)建及其生物學(xué)性能研究.pdf

1、陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)陰離子型聚電解質(zhì)陰離子敏感,對(duì)帶負(fù)電荷的DNA有較高的轉(zhuǎn)運(yùn)能力,還能轉(zhuǎn)運(yùn)RNA、核糖體及其他大電荷的分子和大分子物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染效率比其它脂質(zhì)體高出許多倍，因而被廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)移技術(shù)中。但是陽(yáng)離子脂質(zhì)體與病毒載體相比，具有轉(zhuǎn)運(yùn)效率較低，細(xì)胞毒性大等缺點(diǎn)。本課題在合成的陽(yáng)離子類脂中加入不同助劑制備成新型的復(fù)合型非病毒基因載體，以期提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率，降低細(xì)胞毒性。
　　 本實(shí)驗(yàn)從復(fù)合型非病毒載體的物化性質(zhì)與生物性能兩

2、個(gè)方面研究復(fù)合型非病毒載體以及它與DAN的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)、粒徑、表面形態(tài)等與轉(zhuǎn)運(yùn)效率、細(xì)胞毒性的關(guān)系，以便為提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率提供研究依據(jù)。主要包括瓊脂糖凝膠電泳分析復(fù)合物型非病毒載體與質(zhì)粒pGFP-N2(報(bào)告基因)DNA的結(jié)合能力，以商品試劑 Lipofectamine2000和DOTAP為對(duì)照，利用脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察其基因轉(zhuǎn)染效率，利用MTT法評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染試劑的毒性。
　　 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明：在

3、陽(yáng)離子脂質(zhì)體中加入少量或等量DOPE，延滯DNA能力增強(qiáng)，DOPE量多時(shí)反而減弱；用蔗糖酯修飾的陽(yáng)離子脂質(zhì)體延滯能力變化不明顯；加入殼聚糖脂質(zhì)體，延滯DNA的能力明顯增強(qiáng)。原子力顯微鏡結(jié)果顯示，陽(yáng)離子脂質(zhì)體在云母片上形成的顆粒為球形或橢圓形，粒徑分布較為均勻；陽(yáng)離子脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物在云母片上的顆粒形狀不規(guī)則，粒徑分布不均且比空白脂質(zhì)體的粒徑大。殼聚糖修飾的脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的粒徑變大，形狀更加的不規(guī)則。加入蔗糖酯與DOPE后，轉(zhuǎn)染