殼聚糖脂復(fù)合物納米微粒的構(gòu)建及其生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、本論文制備了亞油酸修飾殼聚糖(LACH)、脫氧膽酸修飾殼聚糖(DACH)兩種殼聚糖脂復(fù)合物,并檢測(cè)了合成的復(fù)合物的細(xì)胞毒性:利用L,ACH制備出納米微粒,分析了該種納米微粒對(duì)成纖維細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性,為納米微粒的進(jìn)一步應(yīng)用提供了基礎(chǔ)研究。 利用EDC介導(dǎo)反應(yīng)合成DACH、LACH殼聚糖脂復(fù)合物,紅外光譜及核磁共振譜檢測(cè)證明了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu),且產(chǎn)物的取代度不受殼聚糖分子量的影響。通過(guò)紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)和MTT檢驗(yàn)測(cè)定了LACH、D

2、ACH的細(xì)胞毒性。結(jié)果表明,各個(gè)LACH、DACH樣品在固態(tài)下不會(huì)引起紅細(xì)胞溶血,然而在溶液狀態(tài)下對(duì)紅細(xì)胞的毒性作用卻不容忽視。兩種殼聚糖脂復(fù)合物在不同濃度下對(duì)胎鼠皮膚成纖維細(xì)胞均未表現(xiàn)出細(xì)胞毒性,且不受樣品分子量和作用時(shí)間的影響。相比于原材料殼聚糖對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的抑制作用,LACH、DACH細(xì)胞相容性改善的原因是多方面的。 通過(guò)熒光探針實(shí)驗(yàn)、激光粒度散射儀、透射電鏡觀察檢測(cè)了LACH納米微粒的成球性質(zhì),結(jié)果表明材料在濃度高于

3、0.1g/l時(shí)即表現(xiàn)出成球趨勢(shì),且隨著濃度增大成球趨勢(shì)愈加明顯;形成的絕大多數(shù)微粒的粒徑在200nm左右,且呈球形,形態(tài)完整。通過(guò)紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)和MTT檢驗(yàn)測(cè)定了LACH納米微粒的細(xì)胞毒性。 結(jié)果表明,LACH溶液的溶血性顯著高于LACH納米微粒懸液,且二者在酸性環(huán)境下均表現(xiàn)出濃度、時(shí)間依賴性的紅細(xì)胞毒性作用;納米微粒在中性培養(yǎng)液中可認(rèn)為對(duì)胎鼠皮膚成纖維細(xì)胞無(wú)毒的,但在pH=6.5的培養(yǎng)液中則表現(xiàn)出時(shí)間、濃度依賴性的毒性作用。納

4、米微粒所表現(xiàn)出的毒性作用主要與酸性環(huán)境下初級(jí)氨基的質(zhì)子化有關(guān)。 本論文還通過(guò)MTT檢驗(yàn)測(cè)定了LACH溶液及納米微粒懸液對(duì)腫瘤細(xì)胞系的毒性。結(jié)果表明,14cpLACH溶液在濃度超過(guò)60μg/ml時(shí)即會(huì)對(duì)Hela細(xì)胞產(chǎn)生顯著毒性,但對(duì)HT29細(xì)胞作用不顯著;小分子量的LACH樣品溶液對(duì)Hela細(xì)胞毒性要顯著高于大分子量樣品溶液；14cp LACH納米微粒作用3-5d時(shí)，濃度為1000μg/ml的樣品會(huì)對(duì)Hela細(xì)胞產(chǎn)生顯著毒性；載藥

5、納米微粒中的阿霉素(ADR)在作用時(shí)間為1d時(shí)只有部分釋放；3d時(shí)，載藥納米微粒中的ADR較第1d時(shí)加速釋放，但仍有部分ADR未釋放；5d時(shí)，載藥納米微粒中的ADR基本全部釋放，表現(xiàn)出類似于游離ADR的作用效果，因此可知載藥納米微粒相對(duì)于游離阿霉素釋藥速度明顯變緩。然而作用時(shí)間為ld和3d時(shí)，ADR濃度較低的載藥納米微粒組和游離ADR組能顯著促進(jìn)tela細(xì)胞的增殖，空白納米微粒不會(huì)促進(jìn)Hela細(xì)胞增殖，這種促進(jìn)作用可能是由低濃度ADR表