兩型骨骼肌纖維在體外培養(yǎng)過程中的相互轉(zhuǎn)換.pdf

1、目的：通過在不同糖濃度條件下體外培養(yǎng)快肌纖維和慢肌纖維，觀察其 MHC同功型表達(dá)情況，以探討快、慢肌纖維相互轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象及其特征。
　　方法：1取兔副半膜肌背側(cè)亞部，（快肌，Ⅱ型肌纖維）和固有半膜肌亞部（慢肌，Ⅰ型肌纖維）通過ATP酶染色法，進(jìn)行肌纖維類型鑒定。2取兔副半膜肌背側(cè)亞部，和固有半膜肌亞部獲取組織和細(xì)胞，按以下分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（1）組織組分別獲取兩個(gè)亞部的肌組織備用。（2）消化組分別從兩個(gè)亞部獲取兩型肌細(xì)胞備用。（3）高糖

2、培養(yǎng)組是將兩型肌細(xì)胞用高糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。（4）低糖培養(yǎng)組是將兩型肌細(xì)胞用低糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。所有培養(yǎng)的兩型肌細(xì)胞分別在1、3、7天取材，并與組織組和消化細(xì)胞組一起檢測(cè)MHC同功型的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1）ATP酶染色顯示家兔副半膜肌背側(cè)亞部著色較深，固有半膜肌亞部著色較淺。未見深淺著色相間排列的現(xiàn)象。
　　2）組織組MHC同功型檢測(cè)結(jié)果顯示Ⅰ型肌纖維表達(dá)MHCⅠ,Ⅱ型肌纖維表達(dá)MHCⅡa,Ⅱb及Ⅱx。
　　3）消化

3、組MHC同功型檢測(cè)結(jié)果顯示Ⅰ型肌纖維表達(dá)MHCⅠ,Ⅱ型肌纖維表達(dá)MHCⅡa,Ⅱb及Ⅱx。
　　4）Ⅰ型細(xì)胞和Ⅱ型細(xì)胞高糖培養(yǎng)組：Ⅰ型細(xì)胞在高糖培養(yǎng)時(shí)第1天以表達(dá)MHCⅠ為主，同時(shí)也表達(dá)少量的MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx。第3天時(shí)仍表達(dá)MHCⅠ，但其表達(dá)量較第1天減少，具有顯著性差異，MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx表達(dá)量與第1天比較明顯增加，有顯著性差異。第7天時(shí)MHCⅠ表達(dá)量與第3天比較進(jìn)一步減少，具有顯著性差異

4、，MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx表達(dá)量與第3天比較無明顯變化。
　　Ⅱ型細(xì)胞在高糖培養(yǎng)時(shí)第1天只表達(dá) MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx，不表達(dá)MHCⅠ；第3天和第7天仍只表達(dá)MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx，不表達(dá)MHCⅠ與第1天比較無明顯差異。
　　5）Ⅰ型細(xì)胞和Ⅱ型細(xì)胞低糖培養(yǎng)組：Ⅰ型細(xì)胞在低糖培養(yǎng)時(shí)第1天以表達(dá)MHCⅠ為主，同時(shí)也表達(dá)少量的MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx。第3天時(shí)仍表達(dá)MHC

5、Ⅰ，其表達(dá)量與第1天無顯著性差異，同時(shí)MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx表達(dá)量增加，與第1天比較有顯著性差異。第7天時(shí)MHCⅠ表達(dá)量與第3天同樣無顯著性差異，MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx表達(dá)量與第3天比較無顯著性差異，但與第1天比較仍存在著顯著性差異。
　　Ⅱ型細(xì)胞在低糖培養(yǎng)時(shí)第1天只表達(dá) MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx，不表達(dá)MHCⅠ。第3天仍表達(dá)MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx，其中Ⅱa和Ⅱb表達(dá)量

6、增加，Ⅱx的表達(dá)量減少，Ⅱb和Ⅱx的表達(dá)量與第1天比較有顯著性差異，同時(shí)開始表達(dá)少量的MHCⅠ。第7天MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx的表達(dá)變化與第3天類似但無顯著性差異，MHCⅠ的表達(dá)量與第3天比較有所增加且與第3天存在有顯著性差異。結(jié)論：兩型骨骼肌纖維在體外分離過程中沒有相互轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象，但在體外培養(yǎng)過程中無論是在高糖培養(yǎng)還是低糖培養(yǎng)條件下，Ⅰ型細(xì)胞都會(huì)在第1天開始向Ⅱ型細(xì)胞轉(zhuǎn)化，此后MHCⅡa, MHCⅡb, MHCⅡx的表達(dá)