生長(zhǎng)因子VEGF,GDF-9、GDF-15在重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障中的水平變化.pdf

1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是臨床常見的一種急腹癥，起病急、并發(fā)癥多。在SAP時(shí)，細(xì)菌可通過受損的腸粘膜移位引起的繼發(fā)感染起著至關(guān)重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，SAP時(shí)腸黏膜屏障功能受到損傷，腸黏膜的通透性增高，腸道內(nèi)毒素及細(xì)菌容易發(fā)生移位，甚至敗血癥，誘發(fā)和加重全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory responsesyndrome，SIRS)、多器官功能障礙綜合癥(Mu

2、ltiple organ dysfunctionsyndrome，MODS)，這是導(dǎo)致SAP死亡的主要原因。SAP時(shí)腸黏膜屏障功能的作用至關(guān)重要。研究影響腸黏膜屏障功能的因素，減少腸黏膜屏障功能的損傷，對(duì)SAP的治療很有幫助。近年來生長(zhǎng)因子在SAP的發(fā)生發(fā)展過程中的作用越來越引起人們的重視。
　　生長(zhǎng)因子(growth factor)是一類多肽類物質(zhì)，能與親和力高的、特異的細(xì)胞膜受體結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)與其他細(xì)胞功能等。生長(zhǎng)因子有很

3、多種，如表皮生長(zhǎng)因子類（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，表皮生長(zhǎng)因子）、類胰島素生長(zhǎng)因子(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β家族(TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP、活化素、生長(zhǎng)分化因子GDF)等。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及生長(zhǎng)分化因子(Growth Differentiation Factor, GDF)，在急性胰腺炎中的作用越來越受重視，VE

4、GF能增加血管通透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，在刺激生長(zhǎng)和病理性血管新生中起主要作用。GDF在多種病理及生理情況下，發(fā)揮促凋亡、抗腫瘤的作用，他們?cè)赟AP時(shí)腸黏膜損害中的作用研究較少。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過測(cè)定VEGF，GDF-9、GDF-15蛋白及mRNA在SAP大鼠小腸中的表達(dá)情況，分析VEGF，GDF-9、GDF-15在重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障中的水平變化;并通過分析應(yīng)用NOD通路抑制劑二甲基苯甲酰羥甲酮（Caspa

5、se-1抑制劑）預(yù)處理后的小腸VEGF，GDF-9、GDF-15的變化，初步探討VEGF，GDF-9、GDF-15在重癥急性胰腺炎腸黏膜屏障中的意義。
　　方法:將60只SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)(N)組、急性胰腺炎(SAP)組和急性胰腺炎+Caspase-1抑制劑(SC)組，各組再分為6h、12h2個(gè)亞組，每個(gè)亞組各10只，應(yīng)用5％牛磺膽酸鈉逆行注入胰管內(nèi)的方法制作動(dòng)物模型。分別在造模后6h、12 h留取胰腺、血、回腸，進(jìn)行HE染色

6、，觀察胰腺及腸道的組織病理學(xué)變化，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血漿中D-乳酸水平以評(píng)價(jià)腸黏膜通透性，應(yīng)用Western-blot、RT-PCR的方法觀察比較三組VEGF，GDF-9、GDF-15蛋白及mRNA的表達(dá)的異同。
　　結(jié)果:
　　1、胰腺組織的病理評(píng)分:HE染色結(jié)果示:N組大鼠6h的胰腺組織細(xì)胞形態(tài)大致正常，12h偶見細(xì)胞水腫;SAP組胰腺組織可見炎性反應(yīng)、組織充血水腫、出血及壞死灶，12 h比6h更明顯;SC組胰腺病變

7、較SAP組輕，可見較少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、出血及壞死灶;病理學(xué)評(píng)分示，SAP組、SC組各時(shí)間點(diǎn)胰腺的病理學(xué)評(píng)分與N組比較，評(píng)分升高(P＜0.01)，SC組與SAP組比較評(píng)分減低，6h組與12h組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，SAP、SC組組胰腺病理評(píng)分12h組比6h組顯著增高(分別P＜0.01，P＜0.05)，N組6h與12h時(shí)間點(diǎn)相比，沒有顯著差異(P＞0.05)。
　　2、腸道病理評(píng)分:N組大鼠腸黏膜結(jié)構(gòu)正常，無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);SA

8、P組大鼠可見絨毛及上皮層壞死脫落，可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);SC組可見較少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見上皮及絨毛結(jié)構(gòu)不完整;SAP組和SC組與N組相比，評(píng)分顯著升高(P＜0.01);SC組較SAP組病理學(xué)變化減輕，評(píng)分降低(P＜0.01);N、SC組6h與12h相比，沒有顯著差異(P＞0.05)，SAP組12h時(shí)間點(diǎn)高于6h(P＜0.05)。
　　3、血漿D-乳酸水平:N組的6h與12h之間相比，沒有顯著差異(P＞0.05)，與N組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比，

9、SAP組大鼠血漿D-乳酸含量均有所升高(P＜0.01)，SC組含量較N組的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)升高(P＜0.01);SC組各時(shí)間點(diǎn)與SAP組相比是顯著下降(P＜0.01);SAP組和SC組血漿D-乳酸水平12h組均高于6h水平(P＜0.05)。
　　4、小腸組織VEGF的表達(dá):Western blot檢測(cè)VEGF蛋白的表達(dá)情況，SAP組、SC組與N組6h、12h相比，蛋白表達(dá)均顯著增高(P＜0.01);SC組與SAP組相比均減低(P＜0.0

10、1);各組6h與12h之間相比，SAP、SC組有差異，12h組表達(dá)量高于6h組(P＜0.05)，N組沒有顯著差異(P＞0.05)。RT-PCR檢測(cè)VEGFmRNA表達(dá)情況，SAP組與N組相比，表達(dá)均明顯增高(P＜0.01)，SC組與SAP組相比VEGF mRNA表達(dá)減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但較N組6h、12h表達(dá)增高（分別P＜0.05，P＜0.01）。各組6h與12h之間相比，SAP、SC組有差異，12h組表達(dá)量高于6h組(

11、P＜0.05)，N組沒有顯著差異(P＞0.05)。
　　5、小腸組織GDF-15的表達(dá):Western blot檢測(cè)GDF-15蛋白的表達(dá)情況，SAP組、SC組與N組比較，蛋白表達(dá)均顯著增高(P＜0.01);SC組與SAP組相比無明顯改變;各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，SAP、SC組有差異，6h組表達(dá)量高于12h組(P＜0.01)，N組沒有顯著差異(P＞0.05)。RT-PCR檢測(cè)GDF-15的表達(dá)情況，SAP組、SC組與N組比較GDF

12、-15mRNA表達(dá)增高(P＜0.05)，SC組與SAP組相比無明顯差異。各6h與12h之間相比，SAP組有差異，6h組表達(dá)量高于12h組(P＜0.01)，SC、N組沒有顯著差異(P＞0.05)。
　　6、小腸組織GDF-9的表達(dá):Western blot檢測(cè)GDF-9蛋白的表達(dá)情況，SAP組、SC組與N組相比，6h組、12h組蛋白表達(dá)均增高(P＜0.01)，SC組與SAP組相比，6h組、12h組均減低(P＜0.05);各組兩個(gè)時(shí)間

13、點(diǎn)之間相比，SC組、SAP組有差異(P＜0.05)，且6h組表達(dá)量高于12組，N組沒有顯著差異(P＞0.05)。RT-PCR檢測(cè)GDF-9mRNA表達(dá)情況，SAP組、SC組與N組相比，6h組、12h組表達(dá)均增高(P＜0.01)，SC組與SAP組相比，6h組、12h組均減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);各組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間相比，SC組、SAP組有差異(P＜0.05)且6h組表達(dá)量高于12h組，N組無明顯差異(P＞0.05)。
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