雙酚A與DNA毒性作用機(jī)理的研究.pdf

1、環(huán)境污染問題是當(dāng)今世界最亟待解決的問題之一，由環(huán)境污染引發(fā)的安全問題越來越受到人們的關(guān)注。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是人類在生產(chǎn)和生活活動中釋放到周圍環(huán)境中以及自然環(huán)境中本來存在的，能通過各種途徑直接或間接進(jìn)入生物體內(nèi)，干擾正常激素內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能，從而改變體內(nèi)激素平衡狀態(tài)，影響人類和動物的生殖功能、免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等正常生物活動。而DNA作為生命機(jī)體中的重要組成成分，是生物體內(nèi)遺傳信息的載體，控制著蛋白質(zhì)的合成和遺傳信息的表達(dá)，在生物的生長發(fā)育

2、、物種延續(xù)等生命活動中起著極為重要的作用。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物能與DNA相互作用，主要機(jī)理為其可以與DNA中的堿基或磷酸骨基團(tuán)結(jié)合，破壞其模板作用，進(jìn)而影響基因調(diào)控和表達(dá)功能，導(dǎo)致腫瘤等疾病。
　　本論文選取類雌激素環(huán)境污染物雙酚A(BPA)為研究對象，分別選用小牛胸腺DNA(ctDNA)和小鼠肝細(xì)胞作為直接受體，采用多種分析手段在體外模擬生理?xiàng)l件下分別從分子水平和細(xì)胞水平兩個(gè)層面綜合評價(jià)了BPA對對生物大分子脫氧核糖核酸的毒性作用機(jī)

3、制。論文主要包括以下內(nèi)容:
　　第一部分:通過熒光光譜、熒光壽命、紫外吸收光譜和圓二色譜等光譜技術(shù)在探索了BPA與ctDNA作用過程中的一些基本特性，并于分子層面研究了BPA對ctDNA的基因毒性作用機(jī)理。確定了BPA的激發(fā)/發(fā)射波長λex/λem=276nm/306nm。當(dāng)BPA濃度超過4×10-4molL-1之后，會發(fā)生自猝滅現(xiàn)象，因此實(shí)驗(yàn)中BPA使用濃度都低于此值。且熒光光譜顯示ctDNA可以對BPA產(chǎn)生猝滅作用，經(jīng)猝滅常數(shù)

4、計(jì)算及熒光壽命測定判定為生成了無熒光基態(tài)復(fù)合物的靜態(tài)猝滅機(jī)制。隨實(shí)驗(yàn)體系pH值增加，BPA對ctDNA熒光猝滅程度增加，且酸性條件時(shí)這種變化更為劇烈，說明二者間結(jié)合模式不是靜電結(jié)合。紫外光譜中ctDNA的加入使BPA的吸收光譜產(chǎn)生減色紅移現(xiàn)象，結(jié)合離子強(qiáng)度增加對二者體系熒光的影響，均說明BPA嵌入ctDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的堿基之間，以嵌插模式相互結(jié)合。圓二色譜中DNA正峰強(qiáng)度的增加與負(fù)峰強(qiáng)度的減弱也表明BPA可以改變ctDNA的空間構(gòu)象。<

5、br>　　第二部分:利用彗星試驗(yàn)和8-OHdG測定等單細(xì)胞分析技術(shù)探究了BPA對小鼠肝細(xì)胞DNA的氧化損傷程度。結(jié)果顯示隨BPA濃度增大、染毒時(shí)間越長，觀測到的彗星拖尾現(xiàn)象越明顯、尾部DNA百分含量及Olive尾矩值均上升，而細(xì)胞中8-OHdG的含量也隨之增加。這一切都說明了BPA確實(shí)對肝細(xì)胞中DNA造成了一定程度的損傷，且這種損傷程度與染毒濃度、染毒時(shí)間呈正相關(guān)。這與分子水平結(jié)論相一致，都說明了BPA對生物體存在基因毒性作用。