2,4-喹唑啉類衍生物調控肝細胞肝癌血管生成的初步研究.pdf

1、一、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌作為我國最常見的惡性腫瘤之一，其目前首選的治療方式為手術切除。但是，我國的大部分患者有乙肝病毒感染及肝硬化背景，肝臟儲備能力較差，適合手術的患者數(shù)量少，即使早期手術切除的小肝癌，遠期預后仍很差。近年來分子靶向治療的出現(xiàn)，帶來了肝癌治療的新革命，分子靶向治療具有高選擇性、高敏感性及高效性等特點，逐漸成為了原發(fā)性肝癌治療的一個重要手段。
　　二、研究目的：
　　本研究旨在探討2,4-喹唑啉類衍

2、生物對人肝細胞肝癌細胞和人臍靜脈內皮細胞增殖能力的影響；對粘附能力的影響；對遷移侵襲能力的影響；對雞胚尿嚢膜血管網生長的影響,通過研究2,4-喹唑啉類衍生物對內皮細胞以及腫瘤細胞的作用，分析2,4-喹唑啉類衍生物衍生物抑制原發(fā)性肝癌血管生成的作用機制。
　　三、研究方法：
　?、俨捎肕TT法，觀察2,4-喹唑啉類衍生物對人肝細胞肝癌細胞株
　?。℉epG-2,SMMC-7721）和人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）增殖

3、能力的影響；②采用內皮細胞細胞外基質黏附實驗，觀察2,4喹唑啉類衍生物對人肝癌細胞株
　?。℉epG-2,SMMC-7721）和人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）粘附能力的影響；③采用劃痕實驗，觀察2,4-喹唑啉類衍生物對人肝癌細胞株（HepG-2,SMMC-7721）和人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）遷移、侵襲能力的影響；④利用雞胚尿囊膜實驗（CAM）模型，研究2,4-喹唑啉類衍生物對血管新生的影響。⑤采用VEGFR2激酶抑制

4、實驗，篩選出抑制血管內皮生長因子受體2（VEGR2）能力最強的抑制劑⑥RT-PCR檢測化合物11d對肝癌細胞VEGFmRNA表達的影響⑦WB檢測化合物11d作用于人臍靜脈血管內皮細胞HUVEC及肝癌細胞HepG-2后血管內皮生長因子（VEGF）下游信號通路AKT/mTOR/P70S6K的影響。
　　四、研究結果：
　　1. MTT實驗結果表明：這15種2,4-喹唑啉衍生物全都具有較強的體外抗肝癌細胞毒性，對這兩種肝癌細胞株都

5、有較好的抑制能力，而對人臍靜脈血管內皮細胞HUVEC細胞毒性相對較小。
　　2.粘附實驗表明：隨著時間、濃度的增加，大部分的2,4喹唑啉類衍生物顯示出對內皮細胞粘附膠原蛋白的數(shù)量明顯較少，粘附的抑制率增加，其中化合物11d的抑制率最高。
　　3.劃痕實驗結果表明，經2，4-喹唑啉類衍生物處理之后，人臍靜脈血管內皮細胞HUVEC遷移數(shù)目明顯減少，劃痕區(qū)被重新覆蓋的面積明顯減少，而其中化合物11d的作用最明顯。
　　4.雞

6、胚尿囊膜實驗（CAM）實驗結果表明，2,4-喹唑啉類衍生物能顯著抑制雞胚尿囊膜血管的生長，其中化合物11d效果最佳。
　　5.VEGFR2激酶抑制實驗表明，所有的2,4-喹唑啉類衍生物均具有良好的抑制VEGFR2激酶的活性，其中化合物11d效果最佳。
　　6.我們選取化合物11d作為后續(xù)實驗所用藥物，PCR結果顯示化合物11d隨著濃度的增加，顯著降低了VEGFmRNA表達，表明化合物11d抑制腫瘤血管生成的作用可能是通過作用

7、于VEGF來完成的。
　　7.我們使用化合物11d作用于人臍靜脈內皮細胞和肝癌細胞，發(fā)現(xiàn)化合物11d降低了AKT、mTOR、P70S6K蛋白的磷酸化水平。
　　五、研究結論：
　　1.2,4-喹唑啉類衍生物對人肝癌細胞株（HepG-2,SMMC-7721）及人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）的增殖具有抑制作用；
　　2.2,4-喹唑啉類衍生物對人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）粘附能力具有抑制作用；
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