降低大腸桿菌耐氟喹諾酮藥物水平的研究.pdf

1、為了給臨床制定合理的抗菌藥物輪換用藥方案提供科學(xué)依據(jù)，以降低細菌耐藥性的危害，本研究采用單因素試驗和正交試驗方法，考察細菌傳代、營養(yǎng)因素和混合培養(yǎng)物中耐藥菌與敏感菌的比例等因素對降低大腸桿菌耐環(huán)丙沙星、恩諾沙星水平的影響。結(jié)果表明：大腸桿菌耐藥菌株經(jīng)210代傳代，對環(huán)丙沙星由高度耐藥（MIC值為128μg/mL）降至中度耐藥（32μg/mL），而恩諾沙星的MIC值卻沒有變化，傳代對環(huán)丙沙星敏感性恢復(fù)的影響高于恩諾沙星。在低營養(yǎng)水平的培養(yǎng)

2、基中傳代，細菌對2種藥物的MIC值分別由高度耐藥（128μg/mL）降至敏感（環(huán)丙沙星0.25μg/mL，恩諾沙星0.5μg/mL）。營養(yǎng)因素水平越低、傳代次數(shù)越多、耐藥菌比例越小，混合培養(yǎng)物中細菌對藥物敏感性的恢復(fù)越快，最終恢復(fù)至敏感。
　　將高度耐藥菌株與敏感菌株混合培養(yǎng)后，在營養(yǎng)匱乏條件下傳代，混合培養(yǎng)物中耐藥菌逐步恢復(fù)至敏感，測序檢測高度耐藥菌株和恢復(fù)敏感菌株的QRDR耐藥決定區(qū)gyrA、gyrB、parC、parE基因，

3、結(jié)果表明：高度耐藥的菌株在gyrA基因83位點發(fā)生Ser→Leu突變，parC基因的58位點和67位點分別發(fā)生了Ser→Arg、Lys→Gln的突變，parE基因的97位點和99位點分別發(fā)生了Ala→Gly和Gly→Ala的突變，而經(jīng)傳代后恢復(fù)敏感性的菌株以及標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922均未檢測出gyrA、parC、gyrB、parE基因的突變。推測在營養(yǎng)匱乏因子作用下混合培養(yǎng)物中耐藥菌生存適應(yīng)度低于敏感菌，隨傳代的持續(xù)而最終消亡，敏感菌

4、成為優(yōu)勢菌群，因此，敏感菌的gyrA、gyrB、parC、parE基因未查出突變。
　　將耐藥大腸桿菌和等量益生菌灌胃于小鼠體內(nèi)，考察益生菌在小鼠體內(nèi)是否可輔助降低細菌耐藥性。結(jié)果表明：耐藥細菌的敏感性在體內(nèi)比體外恢復(fù)得快，并且益生菌沒有輔助降低大腸桿菌耐藥性的作用。
　　將攜帶PMQR耐藥基因的耐藥大腸桿菌分別于含有不同濃度的綠原酸、木犀草素、黃芩苷、大蒜素4種中藥單體的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，以SDS作為對照，研究4種中藥單體在體

5、外降低大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物耐藥性的影響以及耐藥基因的消除情況。結(jié)果表明：與SDS陽性對照組（42.3％）相比，在1/2MIC濃度下，木犀草素1/2MIC的消除率最高（77%），綠原酸次之（73.3%），黃芩苷（47.6%）與SDS相當(dāng)，大蒜素（32.7%）約低于SDS?？傮w效果綠原酸最好，其1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的消除率均顯著大于SDS（P＜0.05）。4種中藥單體1?2MIC處理后耐藥菌對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟