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文檔簡介
1、本課題對冬蟲夏草無性型中國被毛孢(Hirsutella sinensis)提取物的核苷成分、含量及小分子物質反相HPLC指紋圖譜及大分子物質SEC—HPLC色譜圖譜指紋分析方法進行了研究。 RP—HPLC/ESI—MS分析表明,中國被毛孢菌絲體水提物中存在胞苷、尿苷、肌苷、鳥苷和腺苷但不含有蟲草素,含量分別為:565.452±3.157,1004.056±2.418,40.957±0.400,905.858±7.073和748
2、.621±4.915(μg/g),回收率分別為87.20±3.52%,97.46±0.80%,98.06±1.04%,87.54±1.02%,76.92±1.58%和100.50±1.42%,標準曲線分別為:A=1.491E—005c—0.766,A=1.365E—005c—0.533,A=9.159E—006c—0.034,A=9.118E—006c—0.128,A=1.032E—005c—0.161,A=9.788E—006c—0.
3、038(c為對照品濃度/μg/mL,A為相應峰面積)。提取方法研究結果表明,熱水提取比50%乙醇—水熱提和50%乙醇—水超聲提取更適合核苷提取。中國被毛孢菌絲體水提物中胞苷、尿苷、肌苷、鳥苷、腺苷和蟲草素六種核苷的相對比例為17.3:30.8:1.3:27.7:22.9:0.0,用“夾角余弦”方法計算相似度,結果與天然冬蟲夏草較相似(相似度為0.89)。RP—HPLC圖譜用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”軟件分析相似度,發(fā)現(xiàn)中國被毛孢
4、與天然冬蟲夏草的相似度最高,為0.799,超過Cordyceps sinensis CS1菌絲體、金水寶膠囊(Cordyceps sinensis CS4)、蛹蟲草(Cordyceps militaris)菌絲體和子實體與天然冬蟲夏草的相似度(分別為0.718、0.680、0.737和0.504)。因此核苷含量和RP—HPLC圖譜指紋分析可作為中國被毛孢及其產(chǎn)品中小分子物質的質控指標和方法。 為建立大分子物質的指紋分析和相似度定
5、量計算方法,首先用23個靈芝菌絲體粗多糖樣品的分子量分布凝膠滲透HPLC圖譜(SEC—HPLC)進行了分析。結果發(fā)現(xiàn)可將SEC—HPLC圖譜有效分離范圍(10-23min)內所有時間點的信號值為變量,采用“夾角余弦(cosθ)”法定量計算各圖譜的相似度。該相似度用“組間平均鏈鎖(Between—group linkage)”聚類法可重現(xiàn)各靈芝種及株的親緣遠近關系,正確率達到87%。以此方法為模型,分析了中國被毛孢大分子物質的SEC—HP
6、LC圖譜,并與天然冬蟲夏草及CS1菌絲體、金水寶膠囊、蛹蟲草菌絲體和子實體提取物比較。結果發(fā)現(xiàn)中國被毛孢大分子物質的分子量分布與天然蟲草較接近,相似度達到0.966,除蛹蟲草子實體外(相似度0.978),都高于CS1菌絲體、金水寶膠囊、蛹蟲草菌絲體與冬蟲夏草的相似度(分別為0.843、0.805和0.675),結果與RP—HPLC指紋分析結果基本符合。對十種不同培養(yǎng)基及1,3,6個月不同時間獲得的菌絲體分析表明,共16個樣品的SEC—H
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