白靈菇堿提多糖的純化及其抗癌活性的研究.pdf

1、大多數真菌多糖具有抗腫瘤、參與免疫調節(jié)等作用，真菌多糖的研發(fā)也成為真菌研究領域的熱點之一。本文以白靈菇為對象，在前人研究的基礎上，探討了白靈菇多糖的提取、分離純化，進行了白靈菇多糖理化性質的研究，并對其基本結構進行了探討，著重研究了白靈菇多糖對HepG-2肝癌細胞生存、生長的影響，初步探討了其產生作用的機制。
　　采用堿提法對白靈菇多糖進行提取，使粗多糖得率為5.14％;用瓊脂糖凝膠柱層析進行分離純化，得到4個組分:PNA-1、P

2、NA-2、PNA-3及PNA-4，測定出總多糖含量為84.17％，其中含有蛋白質3.70％。
　　對其溶解性、粘度、熱特性、結晶性等理化性質進行了研究，采用高效液相法測得PNA-2分子量為37 kDa; PNA-2的紅外光譜分析出其為β-型多糖，含有吡喃鍵及呋喃鍵;采用氣相色譜法對PNA-2的單糖組分進行分析，得出其單糖含有大量葡萄糖，有少量甘露糖、半乳糖，還有痕量核糖。
　　以HepG-2肝癌細胞為研究對象，通過MTT法研

3、究了白靈菇多糖對其增殖的抑制作用，確定試驗組濃度為PNA-2的12.5μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL;進行細胞劃痕實驗，得出PNA-2能夠抑制HepG-2細胞的遷移;進行了掃描電鏡觀察細胞形態(tài)實驗及AO/EB染色實驗，結果顯示，PNA-2能夠誘導HepG-2細胞凋亡;彗星實驗（單細胞凝膠電泳實驗）表明:48 h后，PNA-2能對HepG-2細胞DNA造成顯著損傷;流式細胞術檢測細胞周期結果顯示，PNA-2將HepG-2

4、細胞阻滯在G0/G1期，并引起細胞凋亡。
　　對PNA-2誘導HepG-2細胞凋亡的作用機制進行了初步探討。羅丹明染色法檢測其線粒體膜電位的變化，結果顯示，PNA-2能明顯破壞HepG-2細胞的線粒體膜電位;對HepG-2細胞促凋亡因子caspase-3、caspase-9、Cytochrome C及抑凋亡因子Bcl-2的表達結果表明，caspase-3、caspase-9、Cytochrome C的表達顯著上升，而Bcl-2表達