STAT3與Sorcin相互作用研究.pdf

1、信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)家族已發(fā)現(xiàn)七個成員，作為轉(zhuǎn)錄因子，多種細胞因子、激素以及生長因子可通過信號轉(zhuǎn)導影響其活性，從而調(diào)控下游靶基因表達，影響和改變細胞功能，如細胞增殖、分化、凋亡、轉(zhuǎn)化，已知道其與免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、腫瘤密切相關(guān)。在這7個成員中，STAT3被研究得最多，且基因敲除研究發(fā)現(xiàn)，它是該家族成員中敲除后唯一引起胚胎致死的基因，說明該基因在個體形成和發(fā)育中有重要的作用。正因為其重要，所以對它的研究方興未艾，尤其什么蛋白

2、與其相互作用而調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性，是研究中的一個熱點，為此，我們利用酵母雙雜交技術(shù)，以STAT3為誘餌，篩選成人肝臟文庫中與其相互作用的蛋白，結(jié)果我們篩到了新的獵物Sorcin。 有關(guān)Sorcin研究不多，已知它是一種可溶性戊-EF手型的Ca2結(jié)合蛋白，分子量大小為22kDa，最初被發(fā)現(xiàn)于多藥耐受性的細胞中，可能與耐藥相關(guān)；另外，報道顯示Sorcin與多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、乳腺癌等癌癥相關(guān)聯(lián)。 因為有報道STAT3與腫瘤

3、和耐藥也相關(guān)，所以我們繼續(xù)深入研究二者是否相互作用。結(jié)果我們通過PCR成功擴增出Sorcin基因，成功構(gòu)建了帶Myc標簽的Sorcin表達載體、帶GST標簽和Flag標簽的STAT3載體，Western-blot檢測三者都表達，然后通過GST-pulldown實驗和Co-IP實驗進一步證明了STAT3和Sorcin的相互作用，最后，我們利用熒光素酶報告基因?qū)嶒炑芯堪l(fā)現(xiàn)Sorcin對STAT3的轉(zhuǎn)錄活性有調(diào)節(jié)作用，并且這種上調(diào)作用具有劑量