鈣代謝與鈣磷蛋白在肺癌骨轉(zhuǎn)移中的意義.pdf

1、第一部分：鈣代謝與肺癌骨轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究
　　背景和目的：
　　骨是實體惡性腫瘤最早轉(zhuǎn)移或唯一轉(zhuǎn)移的常見部位，65％～80%的乳腺癌和前列腺癌以及30%～40%的肺癌會發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，在肺癌患者中骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率可高達(dá)60%～80%。骨轉(zhuǎn)移常會引起嚴(yán)重的骨疼痛及多種并發(fā)癥，當(dāng)骨質(zhì)破壞以溶骨性為主時，大量骨基質(zhì)被破壞釋放出的鈣超過腎和腸清除鈣的能力，患者血鈣水平明顯升高。1,25-二羥維生素D[1,25-dihydroxy vitami

2、n D，1,25(OH)2D3]是維生素D的主要活性代謝產(chǎn)物，參與調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣磷平衡和骨骼代謝，腫瘤患者由于食欲不振以及缺乏日照常會出現(xiàn)維生素D缺乏。有研究表明，在接受唑來膦酸治療骨轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，血鈣濃度及血清25-羥基維生素D[25-hydroxy vitamin D3，25(OH)D3]水平與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)，但是在肺癌骨轉(zhuǎn)移患者中尚未有相關(guān)報道。因此，本研究通過檢測接受雙磷酸鹽治療的肺癌骨轉(zhuǎn)移患者外周血中鈣離

3、子濃度和血清25(OH)D3水平的變化，分析研究骨鈣代謝與肺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　材料和方法：
　　1、選取2013年1月至2014年6月收治的肺癌骨轉(zhuǎn)移患者86例，肺癌無骨轉(zhuǎn)移患者60例，正常人57例作為對照。
　　2、所有肺癌骨轉(zhuǎn)移患者均接受唑來膦酸治療，4mg靜脈滴注，每4周1次。測定肺癌骨轉(zhuǎn)移患者在接受唑來膦酸治療前、肺癌無骨轉(zhuǎn)移患者及正常人血清鈣離子和25(OH)D3濃度，動態(tài)監(jiān)測肺癌骨轉(zhuǎn)移患者

4、在唑來膦酸治療后第2、4、6、8、10、12個月的血鈣和血清25(OH)D3水平變化。
　　3、記錄研究期間肺癌骨轉(zhuǎn)移患者發(fā)生骨相關(guān)事件（skeletal-related events，SREs）和總生存（overall survival，OS）的情況，分析骨鈣代謝與肺癌骨轉(zhuǎn)移患者臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、肺癌骨轉(zhuǎn)移組血鈣基線水平明顯高于肺癌無骨轉(zhuǎn)移組及正常對照組（2.91±0.17 mmol/L vs2

5、.55±0.12 mmol/L，P<0.05；2.91±0.17 mmol/L vs2.43±0.20 mmol/L，P<0.05）；血清25(OH)D3基線水平明顯低于肺癌無骨轉(zhuǎn)移組及正常對照組（39.65±9.57 ng/mL vs45.88±7.24 ng/mL，P<0.05；39.65±9.57 ng/mL vs57.82±8.93 ng/mL，P<0.05）。
　　2、唑來膦酸治療后肺癌骨轉(zhuǎn)移組的血鈣濃度較治療前基線水平

6、明顯下降（2.61±0.12 mmol/L vs2.91±0.17 mmol/L，P<0.05），血清25(OH)D3濃度與治療前基線水平無明顯差異（41.02±7.54 ng/mL vs39.65±9.57 ng/mL，P>0.05）。
　　3、多因素分析結(jié)果顯示，高血鈣和低血清25(OH)D3是影響SREs發(fā)生的獨(dú)立危險因素（OR＝4.566，P＝0.014；OR＝3.843，P＝0.040）。
　　4、高水平血鈣組發(fā)生

7、SREs中位時間明顯短于低水平血鈣組（10.0個月 vs12.0個月，P<0.05），但兩組中位生存時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（13.5個月 vs16.0個月，P>0.05）；低水平25(OH)D3組發(fā)生SREs中位時間和中位生存時間明顯短于高水平25(OH)D3組（9.0個月 vs13.0個月，P<0.05；12.5個月 vs18.0個月，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、血鈣和血清25(OH)D3是預(yù)測接受唑來膦酸治療骨轉(zhuǎn)

8、移的肺癌患者發(fā)生SREs的有效指標(biāo)。
　　2、25(OH)D3對評估肺癌骨轉(zhuǎn)移患者的預(yù)后有一定價值。
　　第二部分：鈣磷蛋白CAPS1在非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及相關(guān)性研究
　　背景和目的：
　　肺癌是目前全世界最常見的惡性腫瘤之一，是導(dǎo)致人類癌性死亡的首位疾病，其中非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell-lung cancer，NSCLC）占了肺癌總體的70%。約有1/3的肺癌患者在確診時已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

9、，其中骨骼是肺癌最常見的轉(zhuǎn)移部位。骨轉(zhuǎn)移的病理基礎(chǔ)主要在于腫瘤細(xì)胞與破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞之間發(fā)生相互作用，破壞了正常骨組織中骨吸收與骨形成的動態(tài)平衡，腫瘤細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子促進(jìn)骨組織中鈣離子的釋放，在第一部分研究中我們發(fā)現(xiàn)血清中鈣離子濃度與肺癌骨轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，同時細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為第二信使在調(diào)節(jié)腫瘤骨轉(zhuǎn)移的過程中也發(fā)揮著重要作用，而參與執(zhí)行這一功能的是鈣結(jié)合蛋白家族成員，鈣磷蛋白（calcyphosine，CAPS1）作為最新發(fā)現(xiàn)的鈣結(jié)

10、合蛋白家族成員，與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)。在前期研究中，我們已通過蛋白組學(xué)方法證實CAPS1在非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移組織中特異性表達(dá)，在此我們將進(jìn)一步研究CAPS1在非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及功能。
　　材料和方法：
　　1、取病理證實的非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移組織、原發(fā)性骨惡性腫瘤（骨肉瘤）及正常骨組織作為對照，利用Western blot和Real-time PCR法證實CAPS1在非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移組織中表達(dá)情況。<

11、br>　　2、用Western blot和Real-time PCR法分別檢測CAPS1在骨轉(zhuǎn)移潛能不同的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中蛋白水平和RNA水平表達(dá)差異。
　　3、構(gòu)建慢病毒包裝的CAPS1過表達(dá)載體，構(gòu)建篩選CAPS1穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞株。
　　4、利用CCK-8實驗、流式細(xì)胞技術(shù)檢測等分別檢測CAPS1對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和凋亡的影響；劃痕實驗和Transwell實驗等方法檢測CAPS1對腫瘤細(xì)胞體外侵襲等能力的影響，在體

12、外觀察CAPS1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的生物學(xué)作用。
　　結(jié)果：
　　1、CAPS1在非小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移組織中表達(dá)顯著上調(diào)。
　　2、CAPS1在低骨轉(zhuǎn)移潛能非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549中表達(dá)明顯低于骨轉(zhuǎn)移潛能較高的H1299細(xì)胞、H460細(xì)胞、SPC-A1細(xì)胞，提示CAPS1可能是一個與肺癌骨轉(zhuǎn)移作用相關(guān)的蛋白。
　　3、成功構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)CAPS1的A549細(xì)胞株。
　　4、體外實驗證實高表達(dá)CAPS1的非