2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩68頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、纖維素是地球上含量最豐富的可再生物質(zhì),纖維素酶能夠?qū)⑵渌鉃槠咸烟牵瑸槭称泛湍茉刺峁┰?,然而目前的纖維素酶活力低、熱穩(wěn)定性差、成本高,其產(chǎn)業(yè)化應用受到嚴重制約,因此有必要對已有的纖維素酶進行改造,使其性能有所改善。本研究同時采用隨機突變和定點飽和突變的方法對臺灣家白蟻內(nèi)切葡聚糖酶CfEG進行了分子進化。
   運用易錯PCR構(gòu)建隨機突變庫,篩選到兩株突變子K28E和F241L。K28E的最適pH比原始酶提高了0.5個單位,F(xiàn)2

2、41L的Tm值下降了近4℃。
   采用半理性設(shè)計方法,在網(wǎng)站SWISS-MODEL以PDB數(shù)據(jù)庫中高山象白蟻內(nèi)切纖維素酶NtEG(PDB id=1Ks8)的三維結(jié)構(gòu)為模板,對CfEG進行三維結(jié)構(gòu)同源建模(二者氨基酸的同源性為79%)。比較同源建模預測的三維結(jié)構(gòu)和模板NtEG的三維結(jié)構(gòu),在此基礎(chǔ)上通過計算機輔助設(shè)計軟件ProSa2003,根據(jù)能量變化確定了CfEG活性中心內(nèi)的六個飽和突變位點D53、D56、E411、D122、R

3、360及Y407,其中D53、D56、E411分別與NtEG的催化殘基D54、D57、E412重合。對位點K28、F241也做了飽和突變以進一步篩選突變子,此外,根據(jù)多序列比對做了定點突變H305Y。
   定點(飽和)突變庫共得到18個突變子。突變子D53E、D56C的羧甲基纖維素酶活提高了20%,疊加突變D53C/D56C、D53E/D56C則喪失了活力,雙突變子D53L/D56I、D53E/D56S的比活比原始酶分別提高了

4、近2倍和1.45倍。E411飽和突變子庫均沒有活性,進一步將其替換為近似氨基酸的E411D、E411Q定點突變子也喪失了酶活。由突變結(jié)果可推斷,位點E411為該酶行使功能的必需殘基。D122、K28、F241位點的突變子均酶活降低或失活,R360及Y407位點突變子的比活和野生酶相差不大。與野生酶相比,突變子D53E、D122C、D122E的酶活最適溫度下降了5℃;突變酶D56C的最適pH提高了1.5個單位,D53L/D56I、D122

5、C、R360K和K28E的最適pH提高了0.5個單位,Y407V和K28H的最適pH下降了0.5個單位;突變酶D53C、D56C的Tm值升高了4℃,D122C、D122E的Tm提高了約2℃,而Y407V、F241L的Tm值降低了近4℃。
   本研究通過蛋白質(zhì)分子進化探索獲得新酶的有效途徑,通過分析比較獲得的突變酶的性質(zhì)變化,積累對工業(yè)用酶分子改造的經(jīng)驗,此外,對研究臺灣家白蟻內(nèi)切葡聚糖酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系也具有非常重要的意義。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論