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文檔簡介
1、該研究旨在采用分子生物學(xué)技術(shù),構(gòu)建一種具有較高耐熱性的β-1,3—1,4—葡聚糖酶基因工程菌,利用其產(chǎn)生的酶制劑來提高大麥在飼料業(yè)和釀酒業(yè)中的應(yīng)用價(jià)值. 試驗(yàn)以篩選得到的具有較高耐熱性的菌株——蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus, BC-10)作為出發(fā)菌株,參考GenBank上登錄的其它來源的β-1,3—1,4—葡聚糖酶基因序列,分析其同源性,并根據(jù)其保守區(qū)設(shè)計(jì)2對引物,即5'端引物5PA1、3PA1和3'端引物5PA2、3PA
2、2.經(jīng)克隆分別得到了該基因的5'端和3'端基因片斷,測序結(jié)果表明,其長度分別為461bp和636bp. 以克隆得到的5'端和3'端基因片斷作為混合模板,以5PA1和3PA2為引物,應(yīng)用SOE技術(shù)(splicingbyoverlapextension,又叫重疊延伸剪接術(shù))嵌套得到了全長基因片斷F1.測序結(jié)果表明,其長度為986bp,與GenBank上所登錄的水解淀粉芽孢桿茵(B.amyloliquefaciens)、枯草芽孢桿菌(B.su
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