肝纖維化進(jìn)程中KLF4與Notch通路關(guān)系的研究.pdf

1、目的:肝星狀細(xì)胞（HSCs）活化并轉(zhuǎn)分化為肌成纖維樣細(xì)胞的過程在肝纖維化過程中起重要作用，抑制其轉(zhuǎn)分化是目前防治肝纖維化的研究熱點(diǎn)。HSC轉(zhuǎn)分化過程類似上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程，KLF4可通過抑制TGF-β/Smad3/Snail和Notch信號(hào)通路，抑制多種組織類型細(xì)胞EMT，然而KLF4在HSC轉(zhuǎn)分化中的作用尚未報(bào)道。
　　有研究已證明Notch通路能夠激活肝星狀細(xì)胞，促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)程，本實(shí)驗(yàn)著重研究KLF4抑制Notch

2、通路的激活作用，并進(jìn)一步為證明KLF4在肝星狀細(xì)胞活化過程中的作用提供依據(jù)，為治療肝纖維化提供新的研究方向。
　　方法：
　　(1)建立小鼠肝纖維化模型，在不同時(shí)期行肝臟組織切片熒光免疫組織化學(xué)分析肝纖維化進(jìn)程中Klf4和Notch通路相關(guān)分子的表達(dá)指標(biāo)。提取不同時(shí)期小鼠肝纖維化模型的肝組織RNA行PCR檢測(cè)，了解在纖維化進(jìn)程中Klf4與Notch通路表達(dá)蛋白的關(guān)系。
　　(2)培養(yǎng)人肝星狀細(xì)胞LX-2細(xì)胞，添加Not

3、ch通路的激活劑TGF-β1[1]（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1）和抑制劑DAPT[2]（一種γ-分泌酶抑制劑）后行western-blot檢測(cè)，了解Notch通路表達(dá)蛋白的變化與klf4的關(guān)系。最后通過細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)上調(diào)klf4后行PCR技術(shù)檢測(cè)Klf4的變化與Notch通路表達(dá)蛋白的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　(1)肝纖維化模型中隨著肝組織纖維化的加重，Klf4在組織中的表達(dá)量逐漸下降，而Notch通路相關(guān)分子的表達(dá)量逐漸上升。肝組織RNA

4、的PCR檢測(cè)也證實(shí)了該結(jié)果。
　　(2)原代細(xì)胞提取后檢測(cè)在不同濃度DAPT的刺激下，KLF4的表達(dá)量是上升的（11.18±7.64，p<0.05）。添加Notch通路激活劑TGF-β1后，LX-2細(xì)胞klf4的表達(dá)量減少，而添加Notch通路抑制劑DAPT后，LX-2細(xì)胞Klf4的表達(dá)量有所升高。通過瞬轉(zhuǎn)上調(diào)klf4的LX-2細(xì)胞中，Jagged-1表達(dá)量較對(duì)照組有所上升，Notch-2表達(dá)量較對(duì)照組有所下降（p<0.05）。<