老年小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙與NMDA受體-NF-Kappa B-NNOS信號(hào)通路關(guān)系的探討.pdf

1、本文主要從以下兩部分展開論述：
　　第一部分 手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)老年小鼠POCD行為學(xué)影響
　　目的:通過左肝外葉切除術(shù)構(gòu)建C57BL/6老年小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙(postoperative cognitive dysfunction or decline，POCD)模型，探索老年小鼠POCD模型的構(gòu)建，以及手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)老年小鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共80只，按隨機(jī)數(shù)組表法分為空白對(duì)照

2、組、麻醉組、假手術(shù)組和手術(shù)組。小鼠在術(shù)前5天接受訓(xùn)練，每天3次，尋找固定隱藏平臺(tái)。第6天接受左肝外葉切除術(shù)。術(shù)后第1，3，7天用“空間探索實(shí)驗(yàn)”評(píng)價(jià)其空間記憶能力，記錄穿臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比。
　　結(jié)果:在空間獲得性實(shí)驗(yàn)中，各組C57BL/6老年小鼠學(xué)習(xí)記憶能力隨著時(shí)間的延長(zhǎng)顯著提高(P＜0.05)并在第5天趨于穩(wěn)定，且組間沒有差異。Morris水迷宮測(cè)試?yán)夏晷∈蟠┡_(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留百分比結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組比較，麻

3、醉組無差異，假手術(shù)組（除術(shù)后7d）和手術(shù)組明顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組相比，手術(shù)組在各時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較，與術(shù)后1d比較，空白組和麻醉組術(shù)后3d、7d無差異;假手術(shù)組術(shù)后3d、7d逐漸恢復(fù)，至術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn)基本恢復(fù)正常(P＜0.05);手術(shù)組術(shù)后3d、7d雖有所恢復(fù)，但仍較正常值明顯下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:左肝外葉切除術(shù)能成功建立C57BL/6老年小鼠POCD模型，且空間記憶能力的損傷在肝切

4、除術(shù)老年小鼠中較假手術(shù)老年小鼠重。
　　第二部分 POCD與NMDA受體-NF-Kappa B-nNOS信號(hào)通路的關(guān)系
　　實(shí)驗(yàn)一
　　目的:對(duì)C57BL/6老年小鼠進(jìn)行手術(shù)并抑制圍術(shù)期應(yīng)激因素（鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜），研究中樞神經(jīng)POCD過程中NMDA受體-NFκ B-nNOS信號(hào)通路的激活。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共80只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、麻醉組、假手術(shù)組和手術(shù)組。觀察內(nèi)容如下:分別

5、于術(shù)后1，3，7d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各組分別有8只動(dòng)物斷頭取腦，ELISA測(cè)定左側(cè)腦組織NMDA受體NR2B，nNOS，NF-κ B，NOS以及NO含量測(cè)定;右側(cè)腦組織RT-PCR測(cè)定突觸素mNRA，PSD-95蛋白mNRA。
　　結(jié)果:檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，各檢測(cè)指標(biāo)(NMDA受體NR2B，NF-κ B，nNOS，NOS)蛋白水平以及NO含量，麻醉組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)無差異;假手術(shù)組（除外術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn)）和手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)明

6、顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組比較，各時(shí)間點(diǎn)手術(shù)組明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較:與術(shù)后1d比較，假手術(shù)組至7d時(shí)基本恢復(fù)正常(P＜0.05);手術(shù)組則逐漸下降，至7d時(shí)降至最低(P＜0.05)。
　　RT-PCR測(cè)定老年小鼠腦內(nèi)突觸素mRNA和PSD-95mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，麻醉組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)無差異;假手術(shù)組（除外術(shù)后7d時(shí)間點(diǎn)）和手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P＜0.05);與假手術(shù)組比較，各時(shí)間

7、點(diǎn)手術(shù)組明顯下降(P＜0.05)。組內(nèi)比較:與術(shù)后1d比較，假手術(shù)組老年小鼠至7d時(shí)基本恢復(fù)正常(P＜0.05);手術(shù)組則逐漸下降，至7d時(shí)降至最低（P＜0.05）。
　　結(jié)論: C57BL/6老年小鼠在構(gòu)建POCD模型后，腦內(nèi)NMDA受體、NF-κB、nNOS蛋白水平的變化趨勢(shì)均呈漸進(jìn)性下降，且7d為最低值。這與腦內(nèi)與突觸相關(guān)的突觸素mRNA和PSD-95蛋白mRNA表達(dá)趨勢(shì)相同，因此提示腦內(nèi)NMDA受體、NF-κB、nNOS蛋

8、白水平的變化是引起老年小鼠POCD的可能機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)二
　　目的:對(duì)C57BL/6老年小鼠進(jìn)行手術(shù)，抑制圍術(shù)期應(yīng)激因素（鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜），通過應(yīng)用NMDA受體激動(dòng)劑(15mg/kg NMDA)驗(yàn)證老年小鼠POCD過程中存在NMDA受體-NFκB-nNOS通路的激活。
　　方法:15月齡健康C57BL/6老年小鼠共56只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組和手術(shù)組。腹腔內(nèi)注射NMDA受體激動(dòng)劑(15mg/kg NMD

9、A)1小時(shí)后行手術(shù)。觀察內(nèi)容如下:分別于術(shù)后1，3，7d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各組分別有8只動(dòng)物斷頭取腦，ELISA測(cè)定左側(cè)腦組織NMDA受體NR2B，nNOS，NF-κB，NOS以及NO含量測(cè)定;右側(cè)腦組織RT-PCR測(cè)定突觸素mRNA，PSD-95蛋白mRNA。
　　結(jié)果:檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，各檢測(cè)指標(biāo)(NMDA受體NR2B、NF-κB、nNOS、NOS)蛋白水平以及NO含量，假手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)無差異;手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間

10、點(diǎn)明顯下降(P＜0.05)。手術(shù)組內(nèi):與術(shù)后1d比較，其余時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P＜0.05)，但術(shù)后7d與3d比較則無差異(P＞0.05)。RT-PCR測(cè)定老年小鼠腦內(nèi)突觸素mRNA和PSD-95mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，假手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)（除術(shù)后1d）無差異;手術(shù)組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P＜0.05)。手術(shù)組內(nèi):與術(shù)后1d比較，其余時(shí)間點(diǎn)明顯下降(P＜0.05)，但術(shù)后7d與3d比較則無差異(P＞0.05)。