ATGL在Leptin介導(dǎo)脂解過程中的表達(dá)調(diào)控及其機(jī)理研究.pdf

1、脂肪組織中的甘油三酯在維持機(jī)體能量平衡過程中起著重要的作用。它的水解是一系列有序調(diào)控的過程，在不同的過程中有不同的酶參與。新近發(fā)現(xiàn)的脂肪酶ATGL特異性地水解甘油三酯，是甘油三酯水解的主要限速酶。同時它與游離脂肪酸的濃度、葡萄糖耐受性及胰島素敏感性緊密相關(guān)。因此，它的表達(dá)調(diào)控很受關(guān)注。脂肪細(xì)胞因子leptin可以提高脂肪細(xì)胞的脂肪分解，諸多現(xiàn)象表明，ATGL在leptin調(diào)控脂解過程中可能發(fā)揮著重要的作用。但ATGL在leptin促脂解

2、過程中的表達(dá)變化及其機(jī)理至今還沒有被直接和系統(tǒng)地研究。 因此，本實(shí)驗(yàn)以與人類生理生化等方面最為相似的豬為模式動物，采用RT-PCR、細(xì)胞培養(yǎng)、甘油和FFA釋放量測定、半定量RT-PCR、Western Blot等方法克隆了豬ATGL的全長CDS，研究了ATGL在leptin促脂解中的表達(dá)變化，并初步探討了其機(jī)理。取得以下主要結(jié)果： 1、成功克隆了豬ATGL基因全長CDS，長度為1446 bp，GenBank登陸號為E

3、U373817。與GerrBank已發(fā)表的人和小鼠的ATGL基因進(jìn)行序列比對，同源性分別為87％和82％，這說明豬ATGL基因與人和小鼠在核苷酸水平有較高的同源性，暗示他們之間具有相似的功能和表達(dá)調(diào)控。豬ATGL基因全長CDS的克隆為研究ATGL在leptin促脂解過程中的表達(dá)變化奠定了一定的基礎(chǔ)。 2、明確了leptin呈濃度依賴性促進(jìn)豬脂肪細(xì)胞的脂解。與對照組相比，5、20和50ng/mL的Leptin均可顯著促進(jìn)甘油的釋

4、放(P<0.01)，并且leptin呈濃度依賴性促進(jìn)甘油的釋放，其中促進(jìn)甘油最大釋放的濃度為50 ng/mL；而與對照組相比，5、20和50 ng/mL，的leptin均可降低FFA的釋放，但差異不顯著(P>0.05)。 3、從體內(nèi)和體外兩個水平研究了ATGL mRNA和蛋白在leptin介導(dǎo)脂解過程中的表達(dá)調(diào)控，首次發(fā)現(xiàn)了在leptin介導(dǎo)脂解的過程中，ATGL mRNA表達(dá)升高的同時卻伴隨ATGL蛋白表達(dá)的下降。在體外豬脂

5、肪細(xì)胞上的研究表明，ATGL mRNA的表達(dá)隨著leptin濃度的增加不斷升高，而ATGL的蛋白卻不斷降低；在活體皮下脂肪組織上的研究表明，ATGL mRNA和蛋白的表達(dá)與血清中l(wèi)eptin的水平密切相關(guān)，高水平的leptin伴隨ATGL mRNA的高表達(dá)，但同時伴隨ATOL蛋白的低表達(dá)。 4、初步研究了ATGL在Leptin介導(dǎo)脂解過程中的表達(dá)調(diào)控機(jī)理，發(fā)現(xiàn)了ATGL在lenin介導(dǎo)脂解中的表達(dá)受到JAK-STAT信號通路、