鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究.pdf

1、鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究學(xué)位論文完成目指導(dǎo)教師簽答辯委員會(huì)成員簽：翔萼竊f：卜：弧脈A目礦、么≥刀≥矧二％y以緲—：；’秀勉弛么摘蛩Illllllllllll[1llllIIlY2178940鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因的鑒定及功能研究摘要牛物體內(nèi)普遍存在的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)PotABCD運(yùn)載體由四個(gè)功能蛋白組成：PotA是三磷酸腺苷酶，為轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)提供能量；PotB和PotC可在雙層膜上形成轉(zhuǎn)運(yùn)通道；PotD是一種胞質(zhì)結(jié)合蛋白，有

2、一個(gè)多胺識(shí)別區(qū)域，對(duì)亞精胺有較高的親和性，對(duì)腐胺親和性較低。鰻弧菌(1_brioanguillal—um)M3中發(fā)現(xiàn)了編碼亞精胺結(jié)合蛋A的三個(gè)推定potD基因：potDl、potD2和potD3。為了研究這三個(gè)基因在鰻弧菌M3亞精胺轉(zhuǎn)運(yùn)中起到的作用以及對(duì)致病性鰻弧菌M3毒力的影響，木研究利用框內(nèi)缺失技術(shù)構(gòu)建了potDl、potD2和potD3單基因缺失突變株和多基因缺失突變株，同時(shí)利用細(xì)菌的接合轉(zhuǎn)移技術(shù)，以低拷貝克隆質(zhì)粒Pmmb207為

3、載體，構(gòu)建了突變株的瓦補(bǔ)株。在排除了鰻弧菌自身合成對(duì)胞內(nèi)多胺含量影響的化學(xué)定義的最低培養(yǎng)基M9中，potDl或potD3基因的單獨(dú)缺失或同時(shí)缺失突變株中多胺的含量與野牛型鰻弧菌M3相比明顯降低，并且其牛長(zhǎng)速度也明顯下降，說(shuō)明potDl和potD3基因能夠參與鰻弧菌M3多胺的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，是鰻弧菌中亞精胺結(jié)合蛋白的編碼基因。potDl和potD3基因通過(guò)對(duì)多胺轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的影響間接的影響了鰻弧菌的牛長(zhǎng)能力以及對(duì)魚(yú)的致病能力。potD2基因與pot

4、Dl和potD3基因之間存在拮抗作用，potD2基因的單獨(dú)缺失不會(huì)影響鰻弧菌胞內(nèi)多胺的含量，雖然它不參與亞精胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的編碼，但是potD2基因能在一定程度上抑制potDl和potD3基因的表達(dá)，所以它的單獨(dú)缺失或與potDl、potD3的同時(shí)缺失能不同程度的改變鰻弧菌的牛長(zhǎng)能力和毒力等。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法進(jìn)一步的驗(yàn)證了上述基因在突變株中的表達(dá)情況，并確定鰻弧菌性狀的改變是由基因表達(dá)量的變化引起的。關(guān)鍵詞：鰻弧菌亞精胺結(jié)合蛋白基因