疏肝健脾法干預(yù)腹瀉型腸易激綜合征的臨床和實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過臨床和實驗研究從腦腸軸結(jié)腸和海馬兩個層面探索調(diào)控腹瀉型腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感性的途徑，并由此研究疏肝健脾法干預(yù)腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證的效應(yīng)機制，通過“方藥（四君子湯合四逆散方）→治法（疏肝健脾法）→病理機制（肝失疏泄導(dǎo)致脾失健運）→生理機能（肝主疏泄助脾胃運化）”的研究思路在一定程度上闡釋肝主疏泄助脾胃運化的生物學(xué)基礎(chǔ)，從而豐富腹瀉型腸易激綜合征發(fā)病機制和中醫(yī)“肝主疏泄助脾胃運化”的生物學(xué)內(nèi)涵。
　　方

2、法:
　　一、臨床研究
　　采用隨機對照雙盲試驗的設(shè)計進行。符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者隨機分為疏肝組、健脾組、疏肝健脾組和安慰劑組，并分別予以四逆散、四君子湯、四逆散合四君子湯和安慰劑治療28±3天。通過病例報告表采集治療前后患者信息，ELISA法檢測治療前后患者血清腦腸肽，統(tǒng)計分析證候積分、腹痛評分、Bristol糞便性狀評分、腹脹評分、血清5-羥色胺、P物質(zhì)、神經(jīng)肽Y的變化。
　　二、實驗研究
　　運用4％醋酸灌腸復(fù)

3、合慢性心理應(yīng)激法制備腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠模型，并予疏肝健脾法進行干預(yù)。通過測量體重、曠場實驗、糖水偏好實驗、Bristol糞便性狀評分、糞便含水率以及腹壁撤退反射評分等方法采集干預(yù)前后大鼠行為學(xué)表現(xiàn);實驗結(jié)束后ELISA法檢測各組大鼠血清、結(jié)腸和海馬組織5-羥色胺、P物質(zhì)、神經(jīng)肽Y等腦腸肽，運用實時熒光定量PCR法和免疫印跡法檢測結(jié)腸和海馬組織MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路ERK1、ERK2和c-fos等指標(biāo)，并按統(tǒng)計學(xué)要求分

4、析相關(guān)指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　一、臨床研究
　?。ㄒ唬┦韪谓∑⒎▽Ω篂a型腸易激綜合征肝郁脾虛證的干預(yù)作用
　　1.年齡、病程和性別四組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;四組患者病程比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;四組患者性別構(gòu)成比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.證候積分疏肝健脾組治療前后證候積分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后證候積分比較，差異有

5、統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后證候積分差值的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.腹痛評分疏肝健脾組治療前后腹痛評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后腹痛評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。疏肝健脾組和安慰劑組治療后腹痛評分差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.Bristol糞便性狀評分疏肝健脾組治療前后Bristol糞便性狀評分比較，差異有統(tǒng)

6、計學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后Bristol糞便性狀評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后Bristol糞便性狀評分差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.腹脹評分疏肝健脾組治療前后腹脹評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。安慰劑組治療前后腹脹評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后腹脹評分差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

7、r>　　（二）疏肝健脾法對腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證患者血清腦腸肽的干預(yù)作用
　　1.5-羥色胺疏肝健脾組治療前后血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。安慰劑組治療前后血清5-HT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清5-HT差值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.P物質(zhì)疏肝健脾組治療前后血清SP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后血清SP比較

8、，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清SP差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.神經(jīng)肽Y疏肝健脾組治療前后血清NPY比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。安慰劑組治療前后血清NPY比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。疏肝健脾組和安慰劑組治療后血清NPY差值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　?。ㄈ┧慕M有效率比較
　　疏肝健脾組有效率為90％，疏肝組有效率為83

9、.33％，健脾組有效率為76.67％，安慰劑組有效率為70％。治療后四組有療效比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　二、實驗研究
　　（一）疏肝健脾法對腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠行為學(xué)的影響
　　1.一般情況造模后正常對照組大鼠活躍，鼠毛整潔有光澤，未觀察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，無肛周污跡，無稀溏或粘液樣大便，墊料干燥無明顯臭味，鼠籠清潔。模型組大鼠活躍度低、鼠毛缺乏光澤并可見少許糞便附著，可見大鼠

10、舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，肛周污跡顯著，糞便稀溏或伴有黏液，墊料臭味明顯，鼠籠清潔度差。疏肝健脾組大鼠表現(xiàn)活躍，鼠毛整潔有光澤，未觀察到大鼠舔舐腹部和弓背抬腹現(xiàn)象，未觀察到肛周污跡和稀溏樣大便，墊料干燥無明顯臭味，鼠籠清潔。
　　2.體重空白組和模型組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和疏肝組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計

11、學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和疏肝健脾組治療前后大鼠體重差值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.糖水偏好實驗空白組和模型組治療后大鼠糖水偏愛百分比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠糖水偏愛百分比比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠糖水偏愛百分比比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠糖水偏愛百分比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

12、5)。
　　4.曠場實驗空白組和模型組治療后大鼠曠場總路程比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠曠場總路程比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠曠場總路程比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠曠場總路程比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　（二）疏肝健脾法對腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛證大鼠外周敏化的作用
　　1.血清腦腸肽

13、　　(1)大鼠血清5-HT空白組和模型組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和健脾組治療后大鼠血清5-HT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。模型組和疏肝組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清5-HT比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(2)大鼠血清SP空白組和模型組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型

14、組和健脾組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清SP比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(3)大鼠血清NPY空白組和模型組治療后大鼠血清NPY比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。模型組和健脾組治療后大鼠血清NPY比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。模型組和疏肝組治療后大鼠血清NPY比較，差異

15、無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。模型組和疏肝健脾組治療后大鼠血清NPY比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　?。ㄒ唬?％醋酸灌腸復(fù)合慢性心理應(yīng)激法造模可導(dǎo)致5-HT、SP和NPY等在腦腸軸異常表達，并激活結(jié)腸和海馬組織MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使c-fos轉(zhuǎn)錄因子的表達異常升高，進而產(chǎn)生腹瀉型腸易激綜合征的內(nèi)臟高敏感性。
　?。ǘ┦韪谓∑⒎ㄖ委煾篂a型腸易激綜合征的效應(yīng)機制與調(diào)節(jié)異常水平5-HT、S

16、P和NPY等腦腸肽介導(dǎo)的MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化，下調(diào)c-fos表達，從而改善外周敏化和中樞敏化有關(guān)。
　?。ㄈ└篂a型腸易激綜合征肝郁脾虛這一核心病機在分子層面的體現(xiàn)是:異常水平腦腸肽引起結(jié)腸和海馬的MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過度激活。
　?。ㄋ模案沃魇栊怪⑽高\化”的生物學(xué)內(nèi)涵與腦腸肽及其受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對腦腸軸中樞和外周的調(diào)控相關(guān)。
　　創(chuàng)新點:
　?。ㄒ唬┴S富了腹瀉型腸易激綜合征的發(fā)病

17、機制，認為MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常變化是引起腹瀉型腸易激綜合征內(nèi)臟高敏感性的重要途徑，并由此入手，發(fā)現(xiàn)疏肝健脾法治療腹瀉型腸易激綜合征的效應(yīng)機制是調(diào)控異常水平腦腸肽引起的MAPK-ERK信號通路變化，降低c-fos的表達，從而改善內(nèi)臟高敏感性。
　　（二）認為腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛這一核心病機的在分子層面的體現(xiàn)與激活腦腸軸外周和中樞的MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)，并由病理反推生理，闡釋了“肝主疏泄助脾胃運化”的生