沙丁魚(yú)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的制備、分離純化及功效研究.pdf

1、沙丁魚(yú)（Sardina melamosticta）是我國(guó)東南沿海重要的魚(yú)類(lèi)資源之一。其顯著特點(diǎn)是：產(chǎn)量高、繁殖快、價(jià)格低廉，是一類(lèi)具有很大開(kāi)發(fā)潛力的魚(yú)類(lèi)資源。本文以沙丁魚(yú)為原料，通過(guò)酶解的方法制備沙丁魚(yú)輔助降血壓肽，并進(jìn)行了成分分析和體內(nèi)功效研究。首先，利用不同的酶解組合對(duì)沙丁魚(yú)肉進(jìn)行酶解，以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）抑制率為指標(biāo)，篩選出最佳的酶解組合，并對(duì)酶解工藝進(jìn)行了優(yōu)化；然后，采用超濾、柱層析的方法對(duì)酶解液進(jìn)行分離純化，所得 AC

2、E抑制活性較強(qiáng)的組分進(jìn)行反相高效液相色譜（RP-HPLC）和氨基酸組成分析；最后，選用原發(fā)性高血壓大鼠（SHR）和正常血壓的京都大鼠（WKY），對(duì)酶解液的體內(nèi)降血壓功效及生理生化影響進(jìn)行了測(cè)定。研究結(jié)果如下：
　　1)最佳酶解組合：木瓜蛋白酶+堿性蛋白酶。最佳酶解工藝：用木瓜蛋白酶進(jìn)行第一步酶解，反應(yīng)溫度65℃、pH7.5、反應(yīng)時(shí)間2.25h、酶添加量4000U/g、料液比30％（W/V）；用堿性蛋白酶進(jìn)行第二步酶解，反應(yīng)溫度65

3、℃、pH10.0、反應(yīng)時(shí)間2.0h、酶添加量5000U/g。工藝優(yōu)化后，沙丁魚(yú)蛋白的水解度（DH）從16.70%提高到28.44%，其酶解液（C=20.0mg/mL）的ACE抑制率則從65.40%提高到73.44%。
　　2)超濾后，得到分子量小于5kDa的透過(guò)液。再經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠Sephadex G-25和G-15兩步柱層析，最終得到3個(gè)ACE抑制活性較強(qiáng)的組分P2-1、P2-2和P3-2（C=1.0mg/mL），其ACE抑制率

4、分別為69.48%、70.42%和75.43%。根據(jù)P2-1、P2-2和P3-2的RP-HPLC和氨基酸組成分析結(jié)果，推測(cè)ACE抑制活性的強(qiáng)弱與其氨基酸組成和疏水性強(qiáng)弱有關(guān)。
　　3)單次灌胃后沙丁魚(yú)ACE抑制肽后，SHR的收縮壓（SBP）出現(xiàn)一定程度的下降（P＜0.01、P＜0.05或P＞0.05），但不能保持穩(wěn)定。經(jīng)連續(xù)4周期灌胃后，SHR的SBP下降明顯（P＜0.05或 P＜0.01），并能保持穩(wěn)定。測(cè)定兩種大鼠的臟器系數(shù)、

5、組織及血清丙二醛（MDA）、血清ACE活力和血管緊張素II（ANG-II）濃度，發(fā)現(xiàn)酶解液僅對(duì)SHR產(chǎn)生顯著的生理生化影響（P＜0.01或P＜0.05），而不會(huì)對(duì)WKY大鼠的生理生化指標(biāo)產(chǎn)生明顯影響（P＞0.05）。此外，灌胃化學(xué)合成降壓藥卡托普利，會(huì)影響WKY的SBP及部分生理生化指標(biāo)（P＜0.01、P＜0.05或P＞0.05）。
　　以沙丁魚(yú)為原料開(kāi)發(fā)輔助降血壓功能食品，制得的產(chǎn)品活性較強(qiáng)，且未發(fā)現(xiàn)安全性問(wèn)題和化學(xué)類(lèi)降壓藥的副