基于TLR9-AP-1信號通路探討益氣祛風、宣痹化飲方治療過敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機制.pdf

1、研究目的:
　　探索益氣祛風、宣痹化飲方能否通過干預TLR9/AP-1信號通路中AP-1的含量及其下游白細胞介素因子來達到治療過敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機制。
　　研究方法:
　　采用“雞卵清白蛋白(OVA)聯(lián)合氫氧化鋁凝膠腹腔注射+OVA霧化吸入激發(fā)”和“OVA滴鼻法”的形式建立豚鼠過敏性鼻炎-哮喘綜合征模型，隨機分為藥物干預組4組和模型組，并設(shè)立空白對照組。藥物干預組中，益氣祛風、宣痹化飲方分為高劑量組、中劑量組

2、、低劑量組，西藥組用地塞米松進行干預，干預2周后，處死豚鼠，留取豚鼠血清、肺組織及鼻粘膜組織和支氣管肺泡灌洗液以檢測:1、肺組織和鼻粘膜組織HE染色切片;2、運用Giemsa染色觀察肺組織及支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞浸潤情況;3、Western Blotting檢測肺組織勻漿液C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13的表達;4、PCR檢測C-Jun、C-Fos的基因表達情況;5、Elisa法檢測血清中IL-4、IL-5

3、、IL-13的含量。
　　研究結(jié)果:
　　3.1 HE染色
　　鼻粘膜:模型組可見上皮細胞破壞變性，纖毛壞死脫落，黏膜下層可見炎細胞浸潤;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組可見鼻粘膜上皮細胞及纖毛不同程度被破壞及脫落。空白對照組，上皮細胞及纖毛良好，未見明顯炎細胞浸潤。
　　肺組織:模型組可見支氣管肺泡破壞，支氣管壁明顯增厚，并伴有滲出，支氣管黏膜下層和肌層、肺間質(zhì)可見大量嗜酸性粒細胞、淋巴細胞等炎細胞

4、浸潤;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的支氣管壁增厚及滲出，支氣管黏膜下層和肌層、肺間質(zhì)可見不同程度的嗜酸性粒細胞、淋巴細胞等炎細胞浸潤。
　　3.2 Giemsa染色
　　BALF:模型組可見大量嗜酸性粒細胞浸潤，中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的嗜酸性粒細胞浸潤。模型組可見大量嗜酸性粒細胞;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的嗜酸性粒

5、細胞存在?？瞻捉M肺組織及支氣管肺泡灌洗未見明顯異常。
　　3.3 ELISA檢測IL-4、IL-5、II-13
　　IL-4:藥物干預組與模型組比有明顯差異(P＜0.01);中藥低劑量組與地塞米松組比較存在差異(P＜0.05)，而中藥三組之間未見差異(P＞0.05);中藥中劑量組與中藥高劑量組和地塞米松組比較未見差異(P＞0.05)。IL-5:藥物干預組與模型組比均明顯差異(P＜0.01);中藥低劑量組與地塞米松組比較存在差

6、異(P＜0.05)，而中藥三組之間未見差異(P＞0.05);中藥中劑量組與中藥高劑量組和地塞米松組比較未見差異(P＞0.05)。IL-13:四組治療組與模型組比起來均有明顯差異(P＜0.01)，而在治療組四組比較中，中藥低劑量組與其余三組存在差異，其中與中藥中劑量組比較存在差異(P＜0.05)，與中藥高劑量組和地塞米松組比較存在明顯差異(P＜0.01);中藥中劑量組與中藥高劑量組比較無明顯差異(P＞0.05)，而與地塞米松組比較存在明顯

7、差異(P＜0.01);中藥高劑量組和地塞米松組比較無差異。
　　3.4 Western Blotting檢測C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13
　　在C-Fos、C-Fos組中，藥物干預組較模型組存在顯著差異(P＜0.01);地塞米松組與中藥高、中、低三組之間比較均未見明顯差異。在IL-4組中，中藥低劑量組與模型組之間未見明顯差異;模型組與中藥高劑量組、中藥高劑量組與地塞米松組存在有顯著差異(P＜0.01

8、);中藥高劑量組與中藥中劑量組、地塞米松組未見明顯差異(P＞0.05)。在IL-5組中，地塞米松組與中藥高劑量組之間未見明顯差異(P＞0.05);與中藥中劑量、低劑量組有顯著差異(P＜0.01);中藥中劑量組、低劑量組兩者未見差異(P＞0.05);與中藥高劑量組有顯著差異(P＜0.01);中藥低劑量組與中藥高劑量組存在顯著差異(P＜0.01)。在IL-13組中，模型組與藥物治療四組有顯著差異(P＜0.01);中藥低劑量組與中藥中劑量組存

9、在差異(P＜0.05)，與中藥高劑量組及地塞米松組存在顯著差異(P＜0.01);中藥中劑量組與中藥高劑量組及地塞米松組未見明顯差異(P＞0.05)。
　　3.5 PCR檢測C-Jun、C-Fos基因表達
　　C-Fos組中，中藥組及地塞米松組與模型組均有明顯差異(P＜0.01)。中藥低劑量組與中藥高劑量組、中藥中劑量組及地塞米松組存在差異(P＜0.05);中藥中劑量組、中藥高劑量組及地塞米松組無明顯差異。
　　C-Ju

10、n組中，中藥組及地塞米松組與模型組均有明顯差異(P＜0.01)。中藥低劑量組與中藥高劑量組及地塞米松組存在明顯差異(P＜0.01);與中藥中劑量組未見明顯差異;中藥中劑量組與中藥高劑量組未見明顯差異，與地塞米松組存在明顯差異(P＜0.01);中藥高劑量組與地塞米松組未見差異。
　　研究結(jié)論:
　　益氣祛風、宣痹化飲方能夠抑制AP-1構(gòu)成因子即C-Jun、C-Fos的基因表達，抑制AP-1的總量，進而進一步抑制AP-1下游的I