脂多糖介導(dǎo)的宮內(nèi)感染對子代大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸發(fā)育調(diào)節(jié)的影響.pdf

1、目的：觀察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）介導(dǎo)的宮內(nèi)感染對子代大鼠海馬鹽皮質(zhì)激素受體（mineralocorticoid receptor，MR）、糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor，GR）表達及下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamus-pituitary-adrenal，HPA）軸調(diào)節(jié)功能的影響，探究宮內(nèi)感染致子代大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的機制，為防治宮內(nèi)感染引起的以學(xué)習(xí)記憶功能障礙為基

2、礎(chǔ)的神經(jīng)精神后遺癥提供依據(jù)。
　　方法：10周齡雌性SD大鼠30只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按雌雄1:1配對，將孕鼠隨機分為對照組（10只）和實驗組（20只）。于孕第10天時，實驗組孕鼠腹腔內(nèi)注射LPS（66μg/kg）溶液，對照組孕鼠腹腔內(nèi)注射相同體積的生理鹽水。于子代大鼠出生后第48天時對其進行如下實驗研究：（1）神經(jīng)行為學(xué)檢測：每組隨機抽取20只子代大鼠，采用曠場實驗檢測子代大鼠對新環(huán)境的探索能力，采用Morris水迷宮實驗檢測子

3、代大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力；（2）每組隨機抽取10只子代大鼠，經(jīng)心臟灌注固定后取大腦，制作石蠟切片，采用蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色法觀察子代大鼠海馬組織的病理學(xué)改變；（3）每組隨機抽取10只子代大鼠，經(jīng)心臟灌注固定后取大腦，制作冰凍切片，采用間接免疫熒光雙標(biāo)法比較子代大鼠海馬區(qū)MR和GR表達情況；（4）每組隨機抽取10只子代大鼠，迅速斷頭后冰上取腦，剝離海馬，采用蛋白質(zhì)印跡實驗（即western blot

4、ting）觀察子代大鼠海馬MR、GR表達量的變化；（5）每組隨機抽取20只子代大鼠，采用地塞米松抑制實驗研究宮內(nèi)感染對子代大鼠HPA軸調(diào)節(jié)功能的影響。
　　結(jié)果：（1）神經(jīng)行為學(xué)檢測結(jié)果示：曠場實驗，實驗組子代大鼠的水平移動格數(shù)及后肢站立次數(shù)均較正常對照組減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.227，2.189，P均<0.05）；Morris水迷宮實驗，定位航行實驗中，對照組和實驗組子代大鼠的逃避潛伏期隨訓(xùn)練天數(shù)的增加均呈逐漸縮短的趨勢

5、，兩組間總體差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=15.487，P<0.01），且于第3天開始，實驗組的逃避潛伏期長于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（d1：F=13.995，P<0.01；d2：F=4.911，P<0.05；d3：F=13.232， P<0.01），空間探索實驗中，實驗組子代大鼠在目標(biāo)象限停留的時間及穿越原平臺所在位置的次數(shù)均少于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（時間：t=4.575，P<0.01；次數(shù)：t=2.230，P<0.05）。

6、（2）HE染色結(jié)果示：正常對照組子代大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)元排列均勻整齊，細胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質(zhì)均勻；實驗組子代大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列雜亂，多處可見細胞核固縮、碎裂、溶解現(xiàn)象，CA3區(qū)神經(jīng)元排列均勻整齊，細胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質(zhì)均勻，DG區(qū)細胞排列稀疏、雜亂，部分細胞核固縮、溶解。（3）免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果示：實驗組和對照組子代大鼠海馬以上各區(qū)均有MR、GR表達，且均在CA1區(qū)表達較多；MR、GR在細胞核和細胞質(zhì)

7、中均有表達，其中MR以細胞質(zhì)為主，GR以細胞核為主；海馬CA1區(qū)，實驗組子代大鼠MR和GR的平均光密度值均較正常對照組減低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.470，2.398，P均<0.05），而兩組間MR/GR比值無統(tǒng)計學(xué)差異；海馬CA3區(qū)，實驗組子代大鼠MR、GR平均光密度值及MR/GR比值與正常對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異；海馬DG區(qū)，實驗組子代大鼠MR平均光密度值與正常對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，實驗組GR平均光密度值較正常對照組增加，差異有統(tǒng)

8、計學(xué)意義（t=-3.720，P<0.01），實驗組MR/GR比值較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.151，P<0.05）。（4）蛋白質(zhì)印跡實驗結(jié)果示：實驗組MR相對表達量于海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)均較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ CA1：t=7.561, P<0.01；CA3：t=3.092，P<0.05），于海馬DG區(qū)與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組GR相對表達量于CA1區(qū)較正常對照組減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.

9、238， P<0.01），于海馬CA3區(qū)與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，于海馬DG區(qū)較對照組增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-6.470，P<0.01）。（5）地塞米松抑制實驗結(jié)果示：子代大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水后的血清皮質(zhì)酮水平（視為基礎(chǔ)血清皮質(zhì)酮水平）及注射地塞米松后的血清皮質(zhì)酮水平，實驗組與對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組子代大鼠腹腔內(nèi)注射地塞米松后的血清皮質(zhì)酮水平較應(yīng)用生理鹽水的血清皮質(zhì)酮水平減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.092，P<0.

10、01），對照組的亦減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.343，P<0.01），說明地塞米松對實驗組和對照組子代大鼠的HPA軸均產(chǎn)生抑制作用，兩組子代大鼠的HPA軸功能正常。
　　結(jié)論：LPS介導(dǎo)的宮內(nèi)感染可引起子代對新環(huán)境的探索能力減退、空間學(xué)習(xí)記憶能力受損；其海馬各區(qū)病理學(xué)改變程度不一，于CA1區(qū)最為嚴重，其次為DG區(qū)，CA3區(qū)未見明顯異常；MR于海馬CA1、CA3區(qū)較正常對照組表達減少，GR于CA1區(qū)表達量較正常對照組減少，而于