風(fēng)濕性瓣膜病患者血清差異多肽組學(xué)臨床評(píng)估意義的研究.pdf

1、從瓣膜病發(fā)生至出現(xiàn)臨床癥狀，可以經(jīng)歷20-40年的期限，在我國瓣膜性心臟病尤其是風(fēng)濕性瓣膜病仍然屬于多發(fā)病，從臨床癥狀產(chǎn)生至充血性心衰及活動(dòng)耐量的明顯下降據(jù)觀察約可經(jīng)歷10-12年，二尖瓣狹窄較多見，合并心功能Ⅳ級(jí)的瓣膜病患者10年自然生存率低于15％。瓣膜置換術(shù)在目前仍將是治療瓣膜病的主要手段。而心房顫動(dòng)是臨床上瓣膜病最常合并的心律失常之一，發(fā)生率高達(dá)60％左右，目前臨床上瓣膜性心臟病外科治療對(duì)患者遠(yuǎn)期生活質(zhì)量影響較大，尤其是對(duì)已經(jīng)合

2、并心房纖顫的患者，房顫的外科治療的遠(yuǎn)期成功率較低，而對(duì)于這類患者病情變化的整個(gè)過程中往往伴隨著多種內(nèi)源性多肽組份的變化，而且這些多肽組份的變化可以給我們對(duì)患者病情、心功能狀態(tài)評(píng)估及干預(yù)治療的方式選擇上有很大意義。
　　目的:
　　通過對(duì)風(fēng)濕性瓣膜病患者血清多肽組學(xué)研究，篩選出表達(dá)顯著差異的多肽，探尋該差異多肽組學(xué)研究法對(duì)風(fēng)濕性瓣膜病臨床評(píng)估的意義。
　　方法:
　　本研究中對(duì)240例研究對(duì)象進(jìn)行分組研究，根據(jù)美國

3、紐約心臟病學(xué)會(huì)(NYHA)1928年心功能分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將240例受試對(duì)象進(jìn)行分組，共分為以下三組:健康對(duì)照組即心功能正常組（不合并器質(zhì)性心臟?。?患者A組即心功能Ⅰ-Ⅱ級(jí)組;患者B組即心功能Ⅲ-Ⅳ級(jí)組，每組各80名受試對(duì)象。健康組受試對(duì)象為門診健康體檢者，符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)，體檢過程中即采集其臨床指標(biāo)和血清標(biāo)本，患者組為住院病人，病人入院后即采集各受試對(duì)象的一般臨床指標(biāo)如:年齡、體重、心率、血壓及心臟超聲檢查的相關(guān)指標(biāo)如左心房直徑、左心室舒張

4、/收縮末期內(nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)、左室縮短率、相對(duì)室壁厚度、左室后壁厚度、間隔厚度及左室質(zhì)量等指標(biāo)，同時(shí)患者入院后次日抽取空腹靜脈血，檢測(cè)各研究對(duì)象的血清BNP水平，剩余血清進(jìn)行多肽組學(xué)研究，每組80個(gè)血清標(biāo)本中，將每16份血清各0.5μl混合成1個(gè)血清標(biāo)本，每組5份混合血清標(biāo)本，采用高效反向非標(biāo)記定量液相質(zhì)譜分析方法血清標(biāo)本進(jìn)行多肽組學(xué)的無標(biāo)記定量分析，每個(gè)標(biāo)本檢測(cè)重復(fù)3次后取平均值。選擇符合上述三組的5份血清樣本，進(jìn)行ELISA法驗(yàn)證叢

5、生蛋白和載脂蛋白AⅠ。蛋白/多肽的定量分析采用基于SWATH數(shù)據(jù)的Peakview軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)定量分析，對(duì)每個(gè)樣本采用強(qiáng)度549 m/z值進(jìn)行歸一化處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SAS9.0軟件完成，兩組間比較應(yīng)用Student's t檢驗(yàn)分析，多肽組間差異的比較采用方差分析，p＜0.01為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　各組研究對(duì)象在一般指標(biāo)如:年齡、體重、收縮壓、舒張壓等，患者兩組與健康組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差

6、異，但患者A、B組與健康組的心率分別是88.15±8.2次/分、88.19±8.5次/分、82.91±10.64次/分，患者組明顯比健康組升高，患者組心率升高的原因有可能風(fēng)濕性瓣膜病并發(fā)心房纖顫或者陣發(fā)性心動(dòng)過速等，但患者組間比較并無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。超聲學(xué)臨床檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患者A/B組的左房內(nèi)徑、左室舒張末內(nèi)徑、左室收縮末內(nèi)徑、射血分?jǐn)?shù)、縮短率等指標(biāo)分別為:(57.03±8.01)/(56.59±7.05) mm、(50.2±5.2

7、4)/(53.08±5.24) mm、(34.45±4.21)/(35.48±4.47)mm、(58.32±4.65)/(55.53±6.05)％、(32.92±4.76)/(30.65±3.69)％，健康組上述指標(biāo)分別是:(31.275±2.61) mm、(44.67±6.36) mm、(29.47±3.13) mm、(68.46±1.84)％、(35.21±2.05)％，患者兩組的左房內(nèi)徑、左室舒張末內(nèi)徑、左室收縮末內(nèi)徑明顯高于健康

8、組，但患者組間比較無明顯差異，患者兩組的射血分?jǐn)?shù)、縮短率明顯低于健康組，且患者兩組間也有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血清學(xué)BNP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患者A組和B組與健康組的血清BNP水平結(jié)果分別是（150.96±23.91）pg/ml、（224.96±20.49）pg/ml、（52.62±12.79）pg/ml對(duì)比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且患者A、B組間比較也有顯著差異。血清多肽差異組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者A、B組和健康對(duì)照組間均有38條蛋白質(zhì)相關(guān)多肽和95條

9、肽具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（校正后的P值＜0.0001），患者組間并未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（這可能與樣本量小、樣本均來源于西南地區(qū)等因素有關(guān)系），這些多肽包括來自包括來自組蛋白H2B、絨毛蛋白樣蛋白、補(bǔ)體家族c4-b、精子結(jié)構(gòu)域蛋白等來源的蛋白相關(guān)多肽。其中，補(bǔ)體蛋白C、C4A、C4B-2、C4b結(jié)合蛋白α鏈均被發(fā)現(xiàn)在患者組明顯下調(diào);其他蛋白如α-1-酸性糖蛋白、α-2-HS糖蛋白、抗胰蛋白酶、α-1-抗胰凝乳蛋白酶、結(jié)合珠蛋白及結(jié)合珠蛋白相關(guān)

10、肽均下調(diào);另外，載脂蛋白AⅠ、載脂蛋白CⅢ等顯著下調(diào)，通過ELISA檢測(cè)法進(jìn)行載脂蛋白AⅠ和叢生蛋白血漿水平的驗(yàn)證中，載脂蛋白AⅠ血漿水平在健康組顯著降低，患者A、B組與健康組分別為(1197.82±69.57)、(1158.86±41.61)、(1414.82±98.11)μg/ml，健康組叢生蛋白血漿水平顯著降低，患者A、B組與健康組分別為(306.22±14.82)、(332.72±15.83)、(177.64±7.88)μg/m

11、l，這些差異表達(dá)的多肽表明風(fēng)濕性瓣膜病根本的表現(xiàn)是一個(gè)動(dòng)態(tài)、復(fù)雜的炎癥和血栓形成過程。
　　結(jié)論:
　　臨床上常用的心臟超聲檢查指標(biāo)如左室內(nèi)徑、室壁相對(duì)厚度及射血分?jǐn)?shù)、縮短分?jǐn)?shù)、BNP的檢測(cè)水平等能夠較好的從心臟結(jié)構(gòu)和功能上反映風(fēng)濕性瓣膜病患者的心臟功能狀態(tài)。我們通過血清差異多肽組學(xué)分析風(fēng)濕性瓣膜病患者與健康人群發(fā)現(xiàn)了有較顯著的多肽的差異表達(dá)，而這些差異的相關(guān)蛋白/多肽大部分來源于炎癥和免疫反應(yīng)、脂質(zhì)代謝類相關(guān)蛋白，表明風(fēng)濕