EZH2對兒童肝母細(xì)胞瘤生長調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：肝母細(xì)胞瘤是兒童最常見的肝臟惡性腫瘤，目前晚期、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移性肝母細(xì)胞瘤的治療仍然面臨挑戰(zhàn)，探究肝母細(xì)胞瘤診療的潛在分子靶點(diǎn)成為一個重要的研究方向。組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的重要組成部分，包括組蛋白甲基化，乙?；茸饔谩Ｑ芯勘砻?，組蛋白修飾異常在腫瘤的形成中起著重要作用，同時也成為腫瘤治療新的靶點(diǎn)。EZH2(enhancer ofzeste homolog2)是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，近年來發(fā)現(xiàn)，EZH2在多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過

2、程中起重要作用。目前，尚無EZH2在兒童肝母細(xì)胞瘤中的相關(guān)研究報道，本研究旨在評估EZH2在肝母細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況，并初步探討其對肝母細(xì)胞瘤生長的影響和可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:首先，我們利用western blotting檢測了7例肝母細(xì)胞瘤及對應(yīng)瘤旁組織中EZH2和細(xì)胞周期蛋白P27的表達(dá)，并用siRNA和慢病毒干擾肝母細(xì)胞瘤HepG2和Huh6細(xì)胞株中EZH2的表達(dá)。接下來，在確定EZH2被干擾下調(diào)后，我們采用CCK-8（

3、Cell Counting Kit-8）法檢測細(xì)胞增殖情況，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期變化。進(jìn)一步地，我們使用了EZH2的抑制劑DZNep，檢測其對腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞克隆形成等的影響。最后，我們利用WNT信號通路基因芯片，探索肝母細(xì)胞瘤Huh6細(xì)胞在EZH2敲除情況下，WNT信號通路中相關(guān)基因的表達(dá)變化，并利用雙熒光素酶報告基因檢測DZNep抑制EZH2后，對WNT通路活性影響。
　　結(jié)果:在肝母細(xì)胞瘤組織中，EZH2的

4、表達(dá)較瘤旁組織明顯升高，P27則在肝母細(xì)胞瘤組織中呈低表達(dá)。肝母細(xì)胞瘤HepG2和Huh6細(xì)胞株中，EZH2表達(dá)抑制后，細(xì)胞增殖明顯減慢，發(fā)生G1/S周期阻滯，P27表達(dá)增加。DZNep抑制肝母細(xì)胞瘤EZH2表達(dá)后，細(xì)胞增殖減慢，凋亡增加，細(xì)胞克隆形成能力減弱。肝母細(xì)胞瘤Huh6細(xì)胞EZH2表達(dá)抑制后，WNT信號通路中的14個基因表達(dá)出現(xiàn)異常，且DZNep抑制EZH2后WNT通路活性反而增加。
　　結(jié)論：EZH2可能是肝母細(xì)胞瘤治