Sox-9基因修飾BMSCs復合骨支架材料構建組織工程椎間盤的實驗研究.pdf

1、目的：本研究利用異種骨制備的脫細胞脫鈣骨組織工程復合多孔支架，將傳代培養(yǎng)的Sox-9基因修飾后SD大鼠骨髓間充質干細胞種植于其中，并在Ba lb/c裸鼠皮下進行移植，檢測細胞支架復合物的理化性能和生物相容性，探討其成為組織工程椎間盤的可行性，為椎間盤組織工程的研究提供實驗依據。
　　方法：（1）復蘇Sox-9基因修飾的SD大鼠骨髓間充質干細胞，采用常規(guī)辦法對其進行傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。同時將已經制作成型的骨支架消毒，

2、放入無菌的24孔板中，將已經進行過脫壁處理的基因修飾骨髓間充質干細胞接種于支架上，體外培養(yǎng)48小時，倒置顯微鏡、掃描電鏡、組織學染色觀察細胞在支架上的粘附情況。（2）細胞支架復合物體外培養(yǎng)2天后，分實驗側和對照側將其植入Balb/c裸鼠背部皮下。體內培養(yǎng)2月后，肉眼觀察裸鼠背部植入部位情況；處死裸鼠，取出細胞支架復合物，行冰凍切片，掃描電鏡、組織學染色觀察細胞在支架上的生長情況，行 II型膠原免疫組化染色。qRT-PCR技術檢測支架中骨

3、髓間充質干細胞的So x-9基因、II型膠原表達水平。
　　結果：（1）鏡下Sox-9基因修飾SD大鼠骨髓間充質干細胞呈長梭形，在第3代開始出現(xiàn)衰老的形態(tài)表現(xiàn)；細胞接種支架后，倒置相差顯微鏡下、掃描電鏡、HE染色觀察骨髓間充質干細胞在支架上粘附良好。（2）細胞支架復合物體內培養(yǎng)2月后，肉眼觀察在裸鼠皮下植入部位周圍無感染及炎癥反應，細胞支架復合物呈楔形，與皮膚內面愈合。II型膠原免疫組化染色陽性，qRT-PCR檢測實驗側支架復合物