2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:用攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)基因的慢病毒病毒載體轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),接種于納米羥基磷灰石/膠原/聚乳酸(nHAC/PLA)材料構(gòu)建組織工程骨,體外觀察成骨表達(dá)情況。
   方法:體外分離、培養(yǎng)SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,傳代培養(yǎng)后分為A、B、C組。A組為BMP-2和eGFP 轉(zhuǎn)染組;B組為空慢病毒病毒載體轉(zhuǎn)染組;C組為未轉(zhuǎn)染組。取攜帶BMP-2和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)的慢病毒 (MOI=

2、25pfu/cell)感染SD大鼠BMSCs。熒光顯微鏡下觀察eGFP的表達(dá),判斷感染效率及細(xì)胞生長情況。通過噻唑籃(MTT)和流式細(xì)胞儀(FCM)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長增殖活力及對細(xì)胞周期的影響。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、免疫組化和酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)檢測BMP-2蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染成功后接種于nHAC/PLA支架,構(gòu)建組織工程骨。堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒檢測ALP 活性,茜紅素染色檢了解成骨情況;掃描電鏡觀察細(xì)胞

3、在支架材料中的黏附、生長和合成分泌骨基質(zhì)的情況。
   結(jié)果:①經(jīng)密度梯度離心法分離、貼壁篩選、培養(yǎng)所獲的細(xì)胞,經(jīng)鑒定是鼠的BMSCs,并且能大量增殖。②慢病毒感染后BMSCs 形態(tài)特征、細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞周期與未轉(zhuǎn)染組相比無顯著變化。③基因轉(zhuǎn)染后48h,RT-PCR、免疫組化和 ELIASA 都能檢測到BMP-2基因的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),而空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組未見其轉(zhuǎn)錄及表達(dá),差異均有顯著性意義(P<0.05)。④ BMP-2 轉(zhuǎn)染

4、的BMSCs 具有成骨細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)特性;轉(zhuǎn)染后的BMSCs的ALP 均較空轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組有顯著增高,差異均有顯著性意義(P<0.05)。⑤ BMP-2基因修飾的BMSCs在nHAC/PLA 支架表面和孔隙內(nèi)黏附、生長良好,仍可高水平表達(dá)BMP-2蛋白。
   結(jié)論:①慢病毒攜帶BMP-2基因可有效感染SD大鼠BMSCs 并使BMP-2 獲得穩(wěn)定大量表達(dá);② BMP-2基因轉(zhuǎn)染后的BMSCs 向成骨細(xì)胞方向分化加快,并

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