金氏真蛇尾(Ophiura kinbergi)皂苷的制備及其生物活性研究.pdf

1、本論文以采自煙臺崆峒島海域的金氏真蛇尾（Ophiura kinbergi）作為原材料，提取了其中的活性物質(zhì)皂苷，然后探究了什么樣的條件下才能有最大提取率，然后將分離純化后的金氏真蛇尾皂苷進(jìn)行最基本物理化學(xué)方面的研究，并進(jìn)一步研究了金氏真蛇尾皂苷的抗氧化活性、抑菌活性和抗腫瘤活性。隨后對已提取過皂苷的金氏真蛇尾殘?jiān)M(jìn)行處理，從中提取金氏真蛇尾多糖，并進(jìn)一步探究其抗氧化活性和抑菌活性。
　　在對金氏真蛇尾皂苷的最佳提取工藝研究中，采用

2、了單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)兩種方法，結(jié)果表明，金氏真蛇尾皂苷的最佳提取條件為：采用體積分?jǐn)?shù)為85％的乙醇溶液作為浸提液，提取溫度為60℃，料液比（m/V）為1:40，重復(fù)提取3次，每次提取3小時(shí)。
　　采用溶劑（85%的乙醇溶液）浸提法得到金氏真蛇尾粗皂苷，將粗皂苷過AB-8大孔樹脂以分離除去部分多糖、無機(jī)鹽和色素，并用洗脫液（去離子水、體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇溶液、40%的乙醇溶液、60%的乙醇溶液、80%的乙醇溶液）依次洗脫，并收集

3、各個(gè)洗脫組分。隨后將80%的乙醇溶液洗脫組分進(jìn)行硅膠柱層析和薄層層析。
　　皂苷種類的鑒定結(jié)果表明金氏真蛇尾皂苷為甾體皂苷；然后將其置于200-800nm的紫外波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，并與標(biāo)準(zhǔn)皂苷進(jìn)行比較，結(jié)果為在215nm處有最大吸收峰。并測定其熔點(diǎn)范圍為241～256℃。
　　通過測定金氏真蛇尾皂苷的總還原力和對氧自由基（羥基自由基和超氧陰離子）的清除作用來測定其抗氧化活性，結(jié)果為：金氏真蛇尾皂苷的總還原力OD值為1.403

4、，此結(jié)果表明金氏真蛇尾皂苷具有一定的抗氧化活性，且金氏真蛇尾皂苷對氧自由基有抑制作用。
　　采用濾紙片法和最低抑菌濃度法（MIC）來測定金氏真蛇尾皂苷的對大腸桿菌(Escherichia coli)、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、青霉(Penicillium glaucum)和金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureusRosenbach)的抑制作用。結(jié)果表明金氏真蛇尾

5、皂苷對此四種受試菌的抑菌圈大小分別為：大腸桿菌最大為16.4mm，金黃色葡萄球菌和啤酒酵母菌次之分別為12.5mm和12.2mm，青霉最弱為10.8mm。金氏真蛇尾皂苷對此四種受試菌的MIC依次為：1.0mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL和4.0mg/mL。
　　金氏真蛇尾皂苷的抗腫瘤活性主要針對HL-60細(xì)胞（白血病細(xì)胞）和SK細(xì)胞（神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞）采用SRB法進(jìn)行研究。結(jié)果表明，金氏真蛇尾皂苷對HL-60細(xì)胞在10

6、0μg/mL時(shí)有最大抑制率為28.7%，對SK細(xì)胞在100μg/mL時(shí)有最大抑制率為26.4%。鑒于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們建議將金氏真蛇尾皂苷往保健品方向發(fā)展。
　　為了更大限度的利用金氏真蛇尾資源，又從金氏真蛇尾殘?jiān)刑崛〉玫搅舜侄嗵?。采用堿提法得金氏真蛇尾多糖，采用苯酚-硫酸法，測得金氏真蛇尾多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.4455x+0.0047(相關(guān)系數(shù)R2=0.9967)，多糖含量為3.18%；單糖測定結(jié)果為多糖中含游離性單

7、糖；而碘-碘化鉀反應(yīng)的結(jié)果是陰性，表明金氏真蛇尾多糖是非淀粉多糖。
　　金氏真蛇尾多糖的抗氧化活性測定與其皂苷的抗氧化活性測定相一致，實(shí)驗(yàn)測得金氏真蛇尾多糖的總還原力OD值為1.145，表明其具有一定的抗氧化活性；且金氏真蛇尾多糖對氧自由基有抑制作用。
　　金氏真蛇尾多糖的抑菌活性測定同樣也是采用濾紙片法測定其抑菌圈大小和MIC法測定其最低抑菌濃度。其抑菌圈大小測定結(jié)果為：大腸桿菌為13.46mm，金黃色葡萄球菌為14.12