HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育和藥物性聾過程中的表達(dá).pdf

1、感音神經(jīng)性聾是耳科的常見病，耳蝸毛細(xì)胞的損傷是引起感音神經(jīng)性聾的重要原因，如何防止毛細(xì)胞損傷、保護毛細(xì)胞是我們研究的重要課題。熱休克蛋白是在真核和原核生物中都廣泛表達(dá)，進(jìn)化中高度保守的一類蛋白質(zhì)，有一個共同的特性就是提高細(xì)胞的應(yīng)激能力，對細(xì)胞起到保護作用。熱休克蛋白60（Heat Shockprotein， HSP60）是分子量為60 kDa的熱休克蛋白家族，目前研究在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，本研究中我們檢測了HSP

2、60在SD大鼠耳蝸發(fā)育過程中和藥物性耳聾模型中的表達(dá)變化，結(jié)果提示隨著耳蝸的發(fā)育中，HSP60表達(dá)量逐漸升高，大鼠藥物性耳聾模型中HSP60的表達(dá)量升高。通過耳蝸免疫熒光染色和免疫組織化學(xué)染色，我們定位HSP60在耳蝸中表達(dá)于Corti器的部分支持細(xì)胞中。推測HSP60在大鼠耳蝸的發(fā)育過程和藥物性耳聾發(fā)生過程中，可能介導(dǎo)支持細(xì)胞對毛細(xì)胞的保護作用。
　　實驗一 HSP60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達(dá)
　　目的：
　　檢測HS

3、P60在大鼠耳蝸發(fā)育中的表達(dá)變化，觀察HSP60在耳蝸發(fā)育中的表達(dá)分布。
　　方法：
　　SD大鼠50只，雌雄不限，按出生后天數(shù)分為五組：P0、P3、P7、P14和P28。實時定量PCR和Western Blot分別檢測HSP60的mRNA和蛋白表達(dá)量的變化；免疫熒光組織化學(xué)染色，觀察HSP60在耳蝸的表達(dá)部位分布及表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　實時定量PCR和Western Blot的結(jié)果顯示HSP60在SD大鼠

4、出生后即有表達(dá)，呈增長趨勢，到P14時，與前三組有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）,P28與P14相同而維持穩(wěn)定狀態(tài)（P＞0.05）。免疫熒光染色，觀察到HSP60于P0-P7沒有明顯陽性表達(dá)，P14和P28表達(dá)于Corti器的部分支持細(xì)胞。
　　結(jié)論：
　　大鼠出生后HSP60在耳蝸中表達(dá)量呈增長趨勢，表達(dá)于Corti器的支持細(xì)胞中，可能在耳蝸發(fā)育過程中對毛細(xì)胞起到了保護作用。
　　實驗二 HSP60在藥物性耳聾大鼠耳蝸中

5、的表達(dá)變化
　　目的：
　　檢測HSP60在大鼠耳蝸的表達(dá)分布及硫酸卡那霉素和呋塞米損傷下的表達(dá)變化。
　　方法：
　　正常成年SD大鼠20只,雌雄不限，隨機分為兩組：對照組和實驗組（D7組），實驗組給予呋塞米100mg/kg頸靜脈注射，而后立即硫酸卡那霉素500mg/kg后腿內(nèi)側(cè)肌肉注射；對照組相應(yīng)的注射等量的生理鹽水。ABR檢測聽力變化；實時定量PCR檢測HSP60的mRNA表達(dá)量的變化；免疫熒光染色觀察HS

6、P60在耳蝸中的表達(dá)變化及分布。
　　結(jié)果：
　　ABR檢測顯示實驗組較對照組明顯升高（P＜0.05），且頻率越高，升高越明顯。實時定量PCR結(jié)果顯示D7組HSP60表達(dá)量升高（P＜0.05）。冰凍切片免疫熒光染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察到 HSP60表達(dá)于Corti器上的支持細(xì)胞內(nèi)。冰凍切片免疫組織化學(xué)染色和基底膜鋪片免疫熒光染色，觀察到D7組HSP60表達(dá)升高。
　　結(jié)論：
　　HSP60表達(dá)于支持細(xì)胞，正常