bFGF shRNA 介導(dǎo)caveolin-1-VEGF通路對(duì)MCAO大鼠跑臺(tái)訓(xùn)練后神經(jīng)血管再生影響.pdf

1、目的：
　　探討bFGF shRNA介導(dǎo)caveolin-1/VEGF通路對(duì)跑臺(tái)訓(xùn)練大鼠腦缺血再灌注后缺血半暗區(qū)神經(jīng)血管再生的變化及其機(jī)制
　　方法：
　　將成年SD大鼠198只隨機(jī)分為：假手術(shù)組(Sham-operated, S, n=18)、模型組（Model, M7/M28, n=36）、模型訓(xùn)練組（Exercise Model, EM7/EM28, n=36）、干擾RNA模型組（siRNA Model,siM7

2、/siM28, n=36）、干擾RNA模型訓(xùn)練組（siRNA Exercise Model,siEM7/siEM28,n=36）、陰性對(duì)照干擾RNA模型訓(xùn)練組（negative control siRNA Exercise Model,NCEM7/NCEM28,n=36）,共6組。造模前兩天siM7/siM28、siEM7/siEM28、NCEM7/NCEM28側(cè)腦室分別注射干擾RNA病毒（5μl,5E+8TU/mL）和陰性對(duì)照病毒（5

3、μl），采用改良線栓法復(fù)制大鼠大腦缺血再灌注模型。每組均于MCAO后1、7、28天進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。EM7/EM28、siEM7/siEM28、NCEM7/NCEM28從MCAO后2天開始跑臺(tái)訓(xùn)練。各組分別隨機(jī)觀察至7天或者28天，每組均取5只大鼠行TTC染色計(jì)算腦梗死體積，余下用WB法檢測(cè)缺血半暗區(qū)bFGF、caveolin-1、VEGF、Sema3A表達(dá)量，免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)VEGFR/CD34、Brdu/Nestin表達(dá)，RT-

4、qPCR檢測(cè)缺血半暗區(qū)bFGF mRNA表達(dá)，電鏡觀察缺血半暗區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和突觸的超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　1、神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分結(jié)果 S組均無神經(jīng)功能缺損癥狀，其余各組在MCAO后1、7、28天，EM組與同期M組比較神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分降低（P＜0.05）；siEM組與同期siM組比較神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分降低（P＜0.05）；siM組與同期M組比較神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分增高（P＜0.05）。
　　2、TTC染色結(jié)果 MCAO后7、28天，

5、除S組無明顯梗死灶,余各組均可見大小不同的白色梗死灶，其中EM組與同期M組比較白色梗死面積減少（P＜0.05）；siEM組與同期siM組比較白色梗死面積減少（P＜0.05）；siM組與同期M組比較白色梗死面積增大（P＜0.05）；NCEM組與同期siEM組比較白色梗死面積減少（P＜0.05）。
　　3、大鼠腦組織結(jié)構(gòu)改變 HE染色：S組未見明顯結(jié)構(gòu)異常；M組大鼠腦組織神經(jīng)結(jié)構(gòu)排列比同期EM紊亂；與M組比較，siM組大鼠腦組織神經(jīng)元

6、之間結(jié)構(gòu)變化更加嚴(yán)重，出現(xiàn)明顯的空隙，組織壞死溶解后產(chǎn)生明顯空洞。
　　4、大鼠腦缺血半暗區(qū)bFGF、caveolin-1、VEGF、Sema3A表達(dá) MCAO后7、28天，與S組比較，M組bFGF、caveolin-1、VEGF、Sema3A表達(dá)均上調(diào)（P＜0.05）;MCAO后7、28天，EM組與同期M組比較bFGF、caveolin-1、VEGF表達(dá)均上調(diào)，但Sema3A表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；MCAO后7、28天，siM

7、組與同期M組比較bFGF、caveolin-1表達(dá)均下調(diào)（P＜0.05）；MCAO后7天 siM組與M組比較VEGF表達(dá)均下調(diào)（P＜0.05），MCAO后28天，siM組與M組比較VEGF表達(dá)無顯著性差異。
　　5、缺血半暗區(qū)Brdu/Nestin、VEGFR（FIK-1）/CD34表達(dá)
　?。?）Brdu/Nestin熒光雙標(biāo)結(jié)果 MCAO后7、28天，EM組與同期M組比較， Brdu/Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著增多（

8、P＜0.05）；siM組與同期M組比較， Brdu/Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著減少（P＜0.05）。
　　（2）VEGFR/CD34熒光雙標(biāo)結(jié)果 MCAO后7天，EM組與同期M組比較，VEGFR/CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著增多（P＜0.05），siM組與同期M組比較，VEGFR/CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著減少（P＜0.05）；MCAO后28天，各組間比較VEGFR/CD34表達(dá)無顯著性差異。
　　6、大鼠腦缺血半暗區(qū)bF

9、GF mRNA表達(dá) MCAO后7、28天，siM組bFGF mRNA表達(dá)量將近是同期M組50％，NCEM組bFGF mRNA表達(dá)量與同期EM組比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　7、缺血半暗區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和突觸的超微結(jié)構(gòu) S組可見突觸外輪廓清晰，突觸數(shù)目眾多，突觸結(jié)構(gòu)清晰，神經(jīng)元形態(tài)正常，其余各組均可見突觸腫脹，輪廓不清晰部分區(qū)域突觸不連接，神經(jīng)元腫脹，其中siM組較其余實(shí)驗(yàn)組結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，典型的突觸結(jié)構(gòu)已不存在，神經(jīng)元腫脹明顯。