外周血中性粒細胞膜堿性磷酸酶的檢測在再生障礙性貧血中的價值研究.pdf

1、目的：
　　本研究應用流式細胞術檢測再生障礙性貧血(Aplastic anemia，AA)患者外周血中性粒細胞膜堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase expression on the membrane of neutrophils，mNAP)的表達，探討其在AA診斷中的價值及mNAP升高的潛在機制。
　　方法：
　　1.收集2014年8月至2015年12月連云港市第一人民醫(yī)院收治初診全血細胞減少患者1

2、98例，所有入選患者的血常規(guī)均符合：Hb<100g/L、RBC<3.5×1012/L、WBC<4.0×109/L、PLT<100×109/L。經臨床癥狀體征、實驗室檢查、骨髓細胞學檢查及病理診斷確診為AA患者52例，非AA導致全血細胞減少患者146例作為疾病對照組。健康對照組100例來自健康體檢者。采集所選標本乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血2ml，流式檢測中性粒細胞mNAP,結果以每個細胞結合的抗體數(shù)(antibodies b

3、ound per cell，AB/c)表示。比較組間差異。
　　2.用流式檢測AA組外周血mNAP表達水平，采用受試者工作特征(Receiver operating characteristic，ROC)曲線評價mNAP對AA的診斷價值。
　　3. ELISA法檢測各組別血清中粒細胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）濃度，比較并分析各組間差異。
　　4

4、.體外分離中性粒細胞，并與G-CSF共培養(yǎng)，流式細胞術檢測中性粒細胞膜NAP的表達，觀察G-CSF對NAP表達的誘導作用。
　　5.統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0軟件，正態(tài)分布計量數(shù)據采用(_χ± s)表示，組間比較采用方差分析，偏態(tài)分布數(shù)據以M(P25～P75)表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。ROC曲線評價mNAP對AA的診斷效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.AA、非A

5、A疾病對照組和健康對照組mNAP檢測結果M(P25～P75)分別為13931(11128–21605) AB/c、1875(1119–3119)AB/c、1831(1371–2411)AB/c，三組患者 mNAP表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。AA組mNAP表達顯著高于非AA組及健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。非AA疾病對照組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.ROC曲線分析結果表明，

6、mNAP診斷AA的ROC曲線下面積為0.95，在最佳切點6388 AB/c時，mNAP診斷敏感性為90.90％(95%CI0.83-0.96)、特異性為96.10%(95%CI0.86-0.99)，擬然比23.2。陽性預測值（PPV）88.7%、陰性預測值（NPV）99.5%。
　　3.AA組、疾病對照組和健康對照組血清G-CSF濃度（_χ± s）為467.74±186.10 pg/ml、110.23±86.00 pg/ml、63

7、.65±38.71 pg/ml，AA組高于疾病對照組和健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；疾病對照組與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義。
　　4.用G-CSF培養(yǎng)體外分離出的中性粒細胞24小時后，流式檢測中性粒細胞膜上NAP的表達。實驗組即經過G-CSF培養(yǎng)后，mNAP值9200.00±1276.71 AB/c，對照組即未加G-CSF，mNAP值2106.67±280.06 AB/c，P<0.01，差異有統(tǒng)計學意義。