中性粒細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝?。∟on-alcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD）是一類主要表現(xiàn)為與酒精攝入無關(guān)的肝臟脂肪沉積、肝臟脂肪性變的臨床病理綜合征。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有10億人患有NAFLD，在我國有近3億人患有NAFLD，NAFLD除了可直接導(dǎo)致肝硬化、肝癌外，還參與動(dòng)脈粥樣硬化和II型糖尿病的發(fā)病，嚴(yán)重威脅著人類的健康。
　　NAFLD會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞受損，損傷和壞死的肝細(xì)胞釋放損傷相關(guān)的模式分子（dam

2、age-associated molecular patterns，DAMP），DAMP被免疫系統(tǒng)識別，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)。本研究通過檢測NAFLD患者和健康人的血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，發(fā)現(xiàn)NAFLD患者血清中三種細(xì)胞因子的水平顯著高于健康人，取NAFLD患者外周血上血液分析儀檢測，發(fā)現(xiàn)NAFLD患者外周血的中性粒細(xì)胞的比例顯著高于健康人（p<0.05）。
　　隨后我們構(gòu)建NAFLD小鼠模型，取外周血上血液分

3、析儀檢測，發(fā)現(xiàn)NAFLD模型小鼠的外周血中的中性粒細(xì)胞的比例顯著高于正常小鼠；檢測NAFLD模型小鼠的肝臟中的中性粒細(xì)胞胞外菌阱(neutrophil extracellular traps, NETs)的水平，發(fā)現(xiàn)NAFLD模型小鼠的肝臟中NETs的水平顯著升高，檢測NAFLD模型小鼠的肝細(xì)胞的壞死，發(fā)現(xiàn)NAFLD模型小鼠的肝細(xì)胞壞死水平高于正常小鼠，分別加入MPO-DNA和Cit-H3的抑制劑后NAFLD模型小鼠的肝細(xì)胞壞死水平下降

4、。我們將NAFLD模型小鼠的中性粒細(xì)胞與NAFLD模型小鼠的肝臟中的Kuffer細(xì)胞共孵育，檢測培養(yǎng)基上清中的IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，發(fā)現(xiàn)3種細(xì)胞因子的水平顯著升高。
　　為研究NAFLD中損傷的肝細(xì)胞通過何種信號通路激活中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致NETs水平升高，我們將500μg anti-Ly6G抗體注射到NAFLD模型小鼠體內(nèi)來刪除其中性粒細(xì)胞，24h后分別將TLR4ko或TLR9ko的中性粒細(xì)胞過繼到NAFLD模型小

5、鼠體內(nèi)，24h后檢測肝組織中NETs、IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，發(fā)現(xiàn)過繼TLR4ko、TLR9ko的中性粒細(xì)胞后的NAFLD模型小鼠的肝臟中NETs和TNF-α的水平均顯著下降，肝細(xì)胞的凋亡水平下降。
　　本次研究表明，NAFLD模型小鼠中，肝細(xì)胞受損后釋放DAMP，通過TLR4和TLR9信號通路激活了中性粒細(xì)胞，肝組織中NETs水平升高，導(dǎo)致更多的肝細(xì)胞壞死，中性粒細(xì)胞還能激活Kuffer細(xì)胞，促進(jìn)其IL-1β、I