藜麥皂苷對(duì)口腔致病菌的抑制作用及其機(jī)理研究.pdf

1、藜麥?zhǔn)前驳谒股矫}主要的糧食作物，因其優(yōu)良的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值在全世界范圍內(nèi)推廣種植。藜麥在加工成藜麥米的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生約20％-35%的麩皮，這些麩皮通常會(huì)被丟棄而造成資源的浪費(fèi)，而麩皮中通常含有約3%-8%的藜麥皂苷。據(jù)報(bào)道藜麥皂苷具有抗炎和抗真菌的效果，但是藜麥皂苷對(duì)口臭相關(guān)的微生物的抑制作用仍不清楚。本課題的主要擬先對(duì)藜麥麩皮皂苷進(jìn)行分離、純化以及堿處理等，然后測(cè)定其對(duì)口腔致病菌包括牙齦卟啉單胞菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌和具核梭狀桿菌的抑制作用及其作用

2、機(jī)理，為藜麥皂苷作為治療口臭產(chǎn)品的添加劑提供理論基礎(chǔ)。
　　將分離、純化以及堿處理等過(guò)程后的皂苷，通過(guò)采用濾紙片法和微量二倍連續(xù)梯度稀釋法來(lái)評(píng)價(jià)皂的抑菌活性。測(cè)定的樣品包括藜麥粗皂苷(QS)、堿處理的粗皂苷(ATS)、30%乙醇洗脫皂苷(QS-30)、堿處理以后30%乙醇洗脫皂苷(ATS-30)、80%乙醇洗脫皂苷(QS-80)、堿處理以后80%乙醇洗脫皂苷(ATS-80)，結(jié)果表明：ATS-80組分對(duì)牙齦卟啉單胞菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌

3、和具核梭狀桿菌的抑制活性最高：牙齦卟啉單胞菌為62.5μg/mL(MIC)和250μg/mL(MBC)；產(chǎn)氣莢膜桿菌為31.3μg/mL(MIC)和250μg/mL(MIC)；具核梭狀桿菌為31.3μg/mL(MIC)和125μg/mL(MBC)。
　　利用高效液相色譜儀(HPLC)以及液質(zhì)聯(lián)用高分辨質(zhì)譜儀(LC/ESI-MS/MS)對(duì)ATS-80進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明：藜麥皂苷經(jīng)過(guò)80%乙醇洗脫的到的組分QS-80在堿處理前后皂苷單

4、體以及各單體含量之間有很大的變化，峰1，2，3和4在堿處理以后80%乙醇溶液洗脫得到的ATS-80中沒(méi)有檢出。QS-80組分中的高極性皂苷含量高于ATS-80為284.5mg/g，而ATS-80組分中低極性皂苷的含量高于QS-80為341.87mg/g。這種堿處理以后皂苷單體極性的變化在抑制微生物活性中起到了關(guān)鍵作用。
　　通過(guò)測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性、細(xì)胞膜的膜電勢(shì)變化、生物被膜的抑制率、生物被膜活性以及細(xì)菌形態(tài)的變化五個(gè)方面來(lái)探

5、究堿處理以后的藜麥皂苷對(duì)口腔致病菌的抑制作用的機(jī)理。結(jié)果表明：ATS-80能夠造成培養(yǎng)液中核酸以及蛋白質(zhì)含量的增加。在ATS-80處理32h以后，其中0-24h之間培養(yǎng)液中核酸和蛋白質(zhì)的含量在穩(wěn)定增加，之后趨于穩(wěn)定狀態(tài)。三種口腔致病菌中具核梭狀桿菌對(duì)ATS-80最為敏感。具核梭狀桿菌在ATS-80不同濃度條件下與空白對(duì)照組相比，核酸和蛋白質(zhì)增長(zhǎng)的倍數(shù)分別為：核酸在MIC下為4.30，MBC下為6.19；蛋白質(zhì)在MIC下為12.22，MB

6、C下為21.36。同時(shí)，ATS-80能夠顯著降低細(xì)菌細(xì)胞膜的膜電勢(shì)。牙齦卟啉單胞菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌以及具核梭狀桿菌三種口腔致病菌在不同濃度的 ATS-80條件處理下的細(xì)胞膜電勢(shì)的變化為：牙齦卟啉單胞菌為48.40%(MIC)和75.07%(MBC)，產(chǎn)氣莢膜桿菌為58.44%(MIC)和80.13%(MBC)，具核梭狀桿菌為54.33%(MIC)和80.38%(MBC)。不同濃度的ATS-80對(duì)具核梭狀桿菌生物膜的抑制率有很大影響。在MI

7、C濃度下是生物被膜的抑制率為38.56%，濃度為MBC時(shí)生物被膜的抑制率為89.73%。ATS-80在不同濃度條件下對(duì)具核梭狀桿菌生物被膜的活性有很大影響?？瞻讓?duì)照組的生物被膜活性為70.435%，最小抑菌濃度(MIC)處理下的生物被膜的活性為40.231%，最小殺菌濃度(MBC)處理下的生物被膜的活性為10.569%。透鏡電子顯微鏡下觀察具核梭狀桿菌在不同濃度的ATS-80處理下的細(xì)菌形態(tài)發(fā)現(xiàn)：正常的具核梭狀桿菌的細(xì)菌形態(tài)具有完整的細(xì)