高效液相色譜法在中草藥分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有高壓、高效、高速、高靈敏度、操作簡單等優(yōu)點?，F(xiàn)如今，高效液相色譜法在中草藥、食品衛(wèi)生、生物工程、環(huán)境安全和石油化工等多方面均具有廣泛的應(yīng)用。高效液相色譜法分離的基本原理是利用流動相對分析成分洗脫過程中，各個組分在固定相上的保留時間不一致從而達到分離的效果。在實際應(yīng)用檢測過程中，分析物在經(jīng)高效液相色譜分析檢測前必須經(jīng)過嚴格的前處理過

2、程，以達到有效萃取分析成分、富集痕量組分的目的，樣品前處理的好壞決定了檢測的靈敏度和準確性。為了實現(xiàn)實驗數(shù)據(jù)更加精準，各種樣品前處理方法以應(yīng)運而生。如何讓前處理方法變得更加綠色、快速、簡單成為廣大化學(xué)研究者一直努力的方向。
　　本文由兩部分構(gòu)成：緒論部分和研究報告。第一部分簡單論述了高效液相色譜法、中草藥、黃酮、有機酸成分以及部分樣品前處理的發(fā)展和應(yīng)用情況。第二部分研究報告中反應(yīng)了利用高效液相色譜法建立的幾種針對不同中草藥成分中的

3、黃酮和有機酸成分的分析方法。
　　1.高效液相色譜法同時測定仙鶴草中6種黃酮
　　建立超聲輔助萃取-高效液相色譜法分離仙鶴草中蘆丁、花旗松素、香豆素、木犀草素、山奈酚和芹菜素6種黃酮及其含量測定的方法。采用 Phenomenex C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm）分離6種成分；流動相為甲醇-0.1%醋酸溶液，梯度洗脫；流速0.8 mL/min，紫外檢測波長320 nm，柱溫35℃。6種成分在15 min內(nèi)均達

4、到基線分離，線性關(guān)系良好（r＞0.9991，n=6），平均回收率均在97.78%～104.4%（RSD＜1.20%，n=3）。結(jié)論：本實驗采用超聲波法提取，方法簡單、快速、經(jīng)濟、可靠，可用于仙鶴草的質(zhì)量監(jiān)控。
　　2. HPLC測定香椿中的有機酸和黃酮等7種活性成分
　　以超聲輔助萃取為前處理方式，建立了高效液相色譜法對香椿中表兒茶素、沒食子酸、兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素和山奈酚7種活性成分進行定性、定量分析的方法。采用P

5、henomenex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm)對7種成分進行分離檢測；流動相采用甲醇-0.1%乙酸溶液；在紫外波長290 nm下，以0.8 mL﹒min-1為流速，柱溫恒定為35℃。回收率范圍保持在99.23%～104.5%(RSD%<1.26%, n=3)。本實驗前處理選擇超聲波法萃取，操作方法簡單有效，實驗數(shù)據(jù)真實可靠，為香椿的進一步研究提供理論依據(jù)。
　　3. HPLC法同時測定紫花地丁中6種活性成分

6、
　　建立超聲輔助萃取-高效液相色譜法分離和測定紫花地丁中秦皮乙素、咖啡酸、蘆丁、柚皮素、木犀草素和芹菜素6種活性成分的方法。采用Phenomenex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分離6種活性成分；流動相：甲醇-0.1%醋酸溶液，梯度洗脫；流速：0.8 mL﹒min-1，紫外檢測波長：340 nm，柱溫：35℃。6種成分在15 min內(nèi)均達到基線分離，線性關(guān)系良好（r>0.9991, n=8），平均回收率范圍

7、：102.13%～104.55%(RSD%<1.20%, n=3)。本實驗采用甲醇-超聲波法提取，方法簡單、快速、經(jīng)濟、數(shù)據(jù)可靠。
　　4.離子液體輔助萃取—高效液相法測定6種草藥中的6種活性成分
　　以離子液體超聲輔助萃取為前處理方式，以高效液相色譜法分離艾葉、車前草、魚腥草、荊芥、半枝蓮、蒲公英6種藥店中常見的中草藥中咖啡鞣酸、蕓香甙、槲皮素、木樨草素、山奈酚和芹菜素6種有效成分，并對其進行定量定性分析。采用Phenom

8、enex C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分離6種成分；高效液相儀器設(shè)置條件優(yōu)化分別為：流動相：甲醇-0.1%乙酸溶液；流速：0.8 mL﹒min-1；紫外檢測波長：290 nm；柱溫：35℃。6種成分可在13 min內(nèi)達到良好的基線分離，線性關(guān)系良（r>0.9991, n=3），平均回收率在99.68%～104.9%(RSD%<1.70%, n=3)。本實驗采用離子液體輔助萃取法具有簡單、快速、萃取效果良好等優(yōu)點，可