小劑量玉米赤霉烯酮對雄性小鼠生殖能力的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEA)，是一種非甾體類霉菌毒素，它具有雌激素樣作用。它廣泛的存在于各種谷物及谷物制品中，在全球范圍內(nèi)數(shù)十個(gè)國家收集的谷物樣本中均發(fā)現(xiàn)污染存在，而且因?yàn)槠湫再|(zhì)比較穩(wěn)定，甚至可以在加熱后的食物中仍有殘存。ZEA能夠干擾雌激素信號通路的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，進(jìn)而影響小鼠、豬、馬等生物的生殖能力。此前研究表明，大劑量的玉米赤霉烯酮(高于無顯著作用濃度，No-Observed Effect Level

2、，NOEL)暴露能夠降低雄性小鼠的精液品質(zhì)，增加生精細(xì)胞的凋亡率，阻礙精子發(fā)生過程，損傷精子DNA完整性，并最終引起雌性受孕率的下降。對于玉米赤霉烯酮來講，目前對其對雄性生殖能力作用的研究都是針對大劑量的毒性作用，且暴露方式選擇均為非自然方式，針對模擬小劑量（低于無顯著作用濃度，No-Observed Effect Level，NOEL）玉米赤霉烯酮在自然條件下暴露對雄性生殖能力影響的研究卻未見報(bào)道。因此，為了研究既往認(rèn)為安全的小劑量的

3、ZEA在自然條件下的暴露對雄性小鼠生殖能力的影響，本研究評估了小劑量的ZEA暴露后小鼠精子發(fā)生、精液品質(zhì)的變化趨勢，以及相關(guān)的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、90只出生后21天的CD-1雄性小鼠，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法，以每組30只的方式隨機(jī)分成3組，分別被定義為0μg/(kg·d)組、20μg/(kg·d)組和40μg/(kg·d)組。
　　2、各組分別暴露于0μg/kg b.w.，20μg/kg b.w.和40μg/kg

4、 b.w.濃度的ZEA，在處理14天、28天、42天后觀察相關(guān)指標(biāo)的變化。
　　3、應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助精液質(zhì)量分析明確精子運(yùn)動(dòng)能力的變化，以及精子密度，超激活率等指標(biāo)的變化。
　　4、應(yīng)用吉姆薩染色后光鏡下計(jì)數(shù)，分析各組之間精子畸形率的變化。
　　5、測量各組小鼠睪丸的質(zhì)量和體積。
　　6、應(yīng)用試劑盒處理后在熒光顯微鏡下觀察，分析各組小鼠精子存活率的變化。
　　7、應(yīng)用免疫組化染色方法，對單位面積曲精小管內(nèi)生精

5、細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并測量直徑。
　　8、應(yīng)用免疫熒光染色方法，觀察第一次減數(shù)分裂期間生精細(xì)胞中DNA雙鏈損傷的發(fā)生率。
　　結(jié)果：
　　1、與0μg/(kg·d)組相比，20μg/(kg·d)組和40μg/(kg·d)組小鼠的精子活力、活動(dòng)性精子、精子濃度、超激活率在處理14天、28天、42天后，均表現(xiàn)出與濃度相關(guān)的下降趨勢，在處理42天后20μg/(kg·d)組和40μg/(kg·d)組的各項(xiàng)指標(biāo)與0μg/(kg·d)組相

6、比，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、與0μg/(kg·d)組相比，20μg/(kg·d)組和40μg/（kg·d）組的畸形精子率呈現(xiàn)與濃度相關(guān)的上升趨勢，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、與0μg/(kg·d)組相比，20μg/（kg·d）組和40μg/（kg·d）組的死亡精子率呈現(xiàn)與濃度相關(guān)的上升趨勢，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、20μg/(kg·d)組和40μg/(kg·d)組小鼠睪丸與0μg/（kg·d）組的相比

7、，小鼠睪丸體積呈現(xiàn)與濃度相關(guān)的下降趨勢，在處理42天后，下降存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、20μg/（kg·d）組和40μg/(kg·d)組小鼠睪丸與0μg/(kg·d)組的相比，小鼠睪丸質(zhì)量呈現(xiàn)與濃度相關(guān)的下降趨勢，在處理42天后，下降存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6、在ZEA處理14天后，20μg/（kg·d）組和40μg/（kg·d）組小鼠單位面積的曲精小管內(nèi)生精細(xì)胞計(jì)數(shù)與0μg/(kg·d)組相比，僅呈現(xiàn)出與濃度無關(guān)的不明顯的下

8、降趨勢。但在處理28天后，20μg/(kg·d)組和40μg/（kg·d）組小鼠單位面積的曲精小管的各級生精細(xì)胞計(jì)數(shù)均表現(xiàn)出與濃度相關(guān)的下降趨勢，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7、在處理14天，28天，42天后，20μg/(kg·d)組和40μg/(kg·d)組與0μg/(kg·d)組相比，以γH2AX為標(biāo)記的DNA雙鏈斷裂陽性的生精細(xì)胞占所有生精細(xì)胞的比例出現(xiàn)與濃度相關(guān)的上升趨勢，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：