膽固醇-半乳糖苷的放大工藝及其制劑的穩(wěn)定性考察.pdf

1、目的:
　　膽固醇-半乳糖苷是本實驗室利用非水相酶促合成法研制的新型配體，可以與磷脂制成配體脂質體納米粒，研究發(fā)現，其脂質體的肝細胞攝取率相較于普通脂質體增加了2-5倍。目前實驗室已成功制成了膽固醇-半乳糖苷介導的藥物脂質體。但是目前對膽固醇-半乳糖苷的合成還處于小試試驗階段，很多參數都不完善，因此本文對膽固醇-半乳糖苷的酶促合成工藝技術進行了放大，通過放大試驗完善了其合成純化的工藝路線。并將放大后的膽固醇-半乳糖苷用于制備紫杉醇

2、配體脂質體;之后對膽固醇-半乳糖苷介導的紫杉醇配體脂質體制劑進行了穩(wěn)定性試驗、制劑配伍試驗以及急性毒性研究。
　　方法:
　　1.在對膽固醇-半乳糖苷進行中試放大的過程中，使用逐步放大的方法，先將其放大至小試時的5倍，在5倍條件下以產率及純度作為評判指標，對膽固醇-半乳糖苷合成及純化過程中的處方工藝流程進行優(yōu)化，使最終產物的產率＞90％，純度＞95％，然后使用優(yōu)化后的處方工藝將反應放大至小試時的50倍，方法同上。
　　

3、2.以紫杉醇標準品作為外標，在HPLC條件下，建立紫杉醇配體脂質體含量測定的方法學。
　　3.以紫杉醇脂質體的凍干粉作為研究對象，分別進行高溫(40℃)、高濕(25℃，RH70％±5％)、強光(4500±500lx)穩(wěn)定性試驗，試驗時長設置為10天，于第0、5、10天取樣，測包封率、Zeta電位、粒徑、pH值、氧化指數等指標;并考察其加速(30±2℃，RH65％±5％)穩(wěn)定性，試驗時長設置為6個月，于第0、1、2、3、6個月取樣，

4、測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數等指標。
　　4.以紫杉醇脂質體的凍干粉作為研究對象，使用0.9％氯化鈉注射液、5％葡萄糖注射液、10％氯化鈉注射液、50％葡萄糖注射液四種輸液分別與其配伍，試驗時長設置為24h，于0、4、8、12、24h取樣測定粒徑、電位、包封率、pH值、氧化指數等指標。
　　5.使用單次給藥注射，以紫杉醇配體脂質體凍干粉作為研究對象，普通紫杉醇脂質體凍干粉作為對照，使用0.9％氯化鈉注射液溶解藥物

5、，試驗動物選用SPF級小鼠，首先通過預實驗確定兩種脂質體的最大安全劑量和最小致死劑量，然后根據公示r=n-1√a/b（r為兩劑量組時間的比值，n為預分組數，a最小致死劑量，b為最大安全劑量）
　　確定最終實驗分組以及每組注射劑量，注射后放置14天，觀察小鼠死亡情況并記錄，計算兩種脂質體的LD50，并進行比較。
　　結果:
　　1.在將膽固醇-半乳糖苷放大至50倍后，通過對乳糖醇和膽固醇-單乙烯酯的摩爾比、酶的種類及用量

6、、混合溶劑的比例等因素單因素考察以及正交試驗，最終得到的產物產率約為96％，純度約為95％。
　　2.在對HPLC法測定紫杉醇配體脂質體內藥物含量進行方法學考察時，結果顯示，脂質體內的其他物質不影響紫杉醇的含量測定，精密度、回收率等顯示結果良好。
　　3.穩(wěn)定性試驗結果表明，脂質體在高溫、高濕、強光照射條件下包封率、粒徑、電位等指標均未產生顯著變化;加速穩(wěn)定性試驗中脂質體在3個月之內，包封率、粒徑、電位等指標均未產生顯著變化

7、，至6個月時包封率等出現較大下降。
　　4.配伍穩(wěn)定性顯示，脂質體凍干粉在于0.9％氯化鈉注射液、5％葡萄糖注射液、10％氯化鈉注射液、50％葡萄糖注射液四種輸液分別配伍后，在24h內包封率、粒徑、電位等指標均未產生顯著變化。
　　5.急性毒性預試驗中，得到了兩種脂質體對小鼠的近似100％死亡的最小致死量和0％死亡的最大耐受量，普通脂質體的為30mg/ml和20mg/ml，紫杉醇配體脂質體的為80mg/ml和40mg/ml，

8、正式試驗階段，通過觀察和記錄小鼠的死亡情況，最終計算得兩種脂質體的LD50，普通紫杉醇脂質體LD5為23.454mg/ml，其95％可信度區(qū)間范圍在22.109-24.788mg/ml;紫杉醇配體脂質體的LD50為63.455 mg/ml，其95％可信度區(qū)間范圍在57.544-71.872mg/ml。
　　結論:
　　1.膽固醇-半乳糖苷在放大到50倍后產率高，純度好，穩(wěn)定性優(yōu)良，可以用于批量試制。
　　2.用于測定紫

9、杉醇配體脂質體的藥物含量的HPLC法，準確性高，專屬性強，靈敏度好，可以在接下來的試驗中用于檢測紫杉醇配體脂質體中紫杉醇藥物的含量。
　　3.穩(wěn)定性試驗表明，在各種極端條件下，短時間內脂質體都可以保持良好的穩(wěn)定性，但是正常情況下不宜貯存超過3個月，而且作為注射劑時，可以很好地與多種輸液配伍，是臨床上理想的新型制劑。
　　4.配伍穩(wěn)定性表明，紫杉醇配體脂質體作為注射劑時，可以很好地與多種輸液配伍，是臨床上理想的新型制劑。