神經(jīng)源性尿路功能障礙大鼠輸尿管平滑肌細胞內(nèi)Ca2+的變化及意義.pdf

1、目的
　　神經(jīng)源性尿路功能障礙(neurogenic urinary tract dysfunction, NUTD)是指控制排尿的中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)受到各種原因?qū)е碌膿p傷后繼而發(fā)生的泌尿系統(tǒng)排尿功能障礙的一類疾病的統(tǒng)稱。該類疾病的病因復(fù)雜，種類繁多，但其總的治療的目的和基本原則是一致的，即盡可能地做到保護上尿路的同時兼顧做到改善下尿路癥狀。前期研究發(fā)現(xiàn) NUTD在病變早期即發(fā)生原發(fā)性輸尿管功能障礙，其與輸尿管平滑肌細胞（

2、ureteral smooth muscle cells,USMC）L型電壓依賴性鈣通道表達降低、鈣激活鉀通道的表達增高以及其超微結(jié)構(gòu)改變有關(guān)，Ca2+相關(guān)離子通道的改變必然導(dǎo)致細胞內(nèi)Ca2+濃度的異常。研究表明，Ca2+能夠調(diào)節(jié)輸尿管平滑肌細胞的興奮性，通過調(diào)節(jié)輸尿管平滑肌的收縮功能從而保證夠維持輸尿管輸送和傳輸尿液的恒定壓力梯度并抵制膀胱輸尿管反流的發(fā)生。本研究通過激光共聚焦顯微鏡觀察NUTD大鼠USMC內(nèi)Ca2+濃度變化及相關(guān) C

3、a2+通道調(diào)節(jié)劑的作用，從離子水平揭示輸尿管原發(fā)功能障礙的發(fā)生病理機理，為以后神經(jīng)源性尿路功能障礙的治療和預(yù)防提供新的思路。
　　方法
　　1、建立動物模型：
　　由河南省實驗動物中心提供SD大鼠45只，雌性，250±20g，適應(yīng)性常規(guī)飼養(yǎng)一周左右，隨機將45只大鼠均分為實驗組（NUTD組）、實驗對照組（EC組）、空白對照組（BC組）。①BC組：不做任何處理。②NUTD組：手術(shù)區(qū)域定位于L1棘突，用手術(shù)器械咬去L1棘突

4、后完全離斷L1脊髓，并徹底破壞L1以下節(jié)段的脊髓，后逐層關(guān)閉手術(shù)區(qū)域并縫合包扎。術(shù)后給予特殊護理。③EC組：只咬除大鼠L1棘突，不做其他處理。
　　2、三組大鼠經(jīng)過6周的飼養(yǎng)后，均行影像尿動力學(xué)檢查，進行膀胱輸尿管功能評估，然后可處死大鼠后采用酶分離法提取輸尿管平滑肌原代細胞并鑒定。
　　3、應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡對NUTD組、EC組、BC組輸尿管平滑肌原代細胞內(nèi)Ca2+濃度進行測定。
　　4、應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡比較不

5、同濃度L-型鈣通道激動劑對NUTD組輸尿管平滑肌原代細胞內(nèi)Ca2+濃度作用差異。
　　結(jié)果
　　1、動物模型建立后6周 NUTD組大鼠逼尿肌無收縮，無膀胱輸尿管返流，復(fù)合實驗動物模型建立標準。
　　2、提取細胞培養(yǎng)24h后貼壁生長，大部分細胞為長梭形，純化后細胞形態(tài)較一致，繼續(xù)生長可見“峰和谷”樣結(jié)構(gòu)。免疫熒光檢測α—actin陽性，證實為USMC。
　　3、激光共聚焦顯微鏡下NUTD組胞內(nèi)Ca2+熒光強度為9.

6、80±1.11，較其他兩組顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,BC組和 EC組分別為31.44±2.82,32.06±3.67，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，圖4、5)。
　　4、激光共聚焦顯微鏡下10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L的 BayK8644均能夠升高NUTD組胞內(nèi)Ca2+濃度，其平均熒光強度相對增加值分別為3.80±1.30，10.04±2.15，19.89±2.06，差異具有