普羅布考對糖尿病ApoE基因敲除小鼠動脈弱樣硬化病變的影響及其機制.pdf

1、目的:
　　研究證明高糖條件下可促進(jìn)炎性單核細(xì)胞亞群的增生與分化，從而加速動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)病變，且可能與氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。普羅布考作為一種抗炎、抗氧化的藥物，并具有抗AS的生物學(xué)效應(yīng)。本實驗探討普羅布考對糖尿病AS病變的影響及其與各單核細(xì)胞亞群分化的關(guān)系。
　　材料與方法:
　　24只6周齡雄性ApoE-/-小鼠給予鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)55mg/kg，連

2、續(xù)5天腹腔注射，8只6周齡雄性ApoE-/-小鼠給予等量的檸檬酸緩沖液注射，空腹血糖≥300mg/dl考慮為糖尿病。小鼠隨機分為4組，每組8只:高脂組，糖尿病組(STZ)，普羅布考組(STZ+1％普羅布考)，辛伐他汀組（STZ+辛伐他汀每天50mg/kg灌胃），4組均給予高脂飼料（21％脂肪+0.15％膽固醇）喂養(yǎng)4周。測量體重、空腹血糖、血漿血脂水平，油紅O染色評估AS病變程度，流式細(xì)胞儀檢測外周血、脾臟單核細(xì)胞各亞群的分化情況， E

3、LISA檢測血漿中炎性因子水平。
　　統(tǒng)計分析:實驗數(shù)據(jù)采用Prism Graph6.0軟件統(tǒng)計分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗(unpaired t-test)，相關(guān)性分析采用Pearson雙變量相關(guān)分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　糖尿病以及普羅布考、辛伐他汀干預(yù)對小鼠的體重并沒有顯著影響。實驗結(jié)束時，與高脂組相比，糖尿病組空腹血糖水平(P=0.03)、甘

4、油三酯(Triglyceride，TG)(P=0.019)、低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）(P=0.006)水平顯著升高。與糖尿病組相比，普羅布考和辛伐他汀對空腹血糖(P=0.89，P=0.75)及TG(P=0.94，P=0.62)無顯著的影響，辛伐他汀組血漿LDL-C水平無顯著變化(P=0.352)，普羅布考可顯著降低LDL-C水平達(dá)31.61％(P=0.01)

5、，相比辛伐他汀，普羅布考可顯著降低LDL-C水平達(dá)23.46％(P=0.016)。與高脂組相比，糖尿病組AS病變面積（25.52±7.59×104μm2 Vs8.73±2.08×104μm2，p=0.000）及AS病變面積管腔百分比（20.29±5.08％ Vs7.49±1.82％，p=0.000）顯著升高。與糖尿病組相比，普羅布考（16.09±7.85×104μm2 Vs25.52±7.59×104μm2，p=0.035）和辛伐他?。?/p>

6、16.64±5.51×104μm2 Vs25.52±7.59×104μm2，p=0.018）可顯著減小AS病變面積，同樣，普羅布考（14.08±5.45％Vs20.29±5.08％，P=0.04）和辛伐他?。?5.33±3.11％Vs20.29±5.08％，P=0.033）也可以減少AS病變面積管腔百分比。但普羅布考和辛伐他汀兩組小鼠AS病變面積及AS病變面積管腔百分比無顯著差異。血漿中LDL-C水平與主動脈竇橫切面的AS病變面積間呈顯

7、著正相關(guān)(r=0.54，P=0.004)，同樣，LDL-C水平與AS病變面積管腔百分比間亦呈顯著正相關(guān)(r=0.561，P=0.003)。糖尿病組在外周血（91.17±2.34％ Vs88.76±2.65％，P=0.021）、脾臟（24.42±2.63％ Vs21.56±2.13％，P=0.000）中的單核細(xì)胞總數(shù)百分比較高脂組顯著升高。相比于糖尿病組，普羅布考和辛伐他汀對外周血(P=0.985，P=0.560)、脾臟(P=0.435，

8、P=0.438)單核細(xì)胞總數(shù)百分比無顯著影響。糖尿病組鼠在外周血(62.1±13.0％ Vs46.4±8.1％,P=0.003)、脾臟(9.1±1.8％Vs7.7±0.8％,P=0.015)的Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群均較高脂組顯著增加。與糖尿病組相比，普羅布考組(44.8±6.4％ Vs62.1±13.0％，P=0.000)和辛伐他汀組(47.9±11.6％ Vs62.1±13.0％，P=0.002)的外周血Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群

9、分化顯著減少，脾臟Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群分化在普羅布考組（7.8±1.9％ Vs9.1±1.8％，P=0.013）和辛伐他汀組（7.9±1.3％Vs9.1±1.8％，P=0.027）均較糖尿病組顯著減少，但外周血和脾臟Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群分化在普羅布考組與辛伐他汀組間無顯著差異。對于Ly6Clow單核細(xì)胞亞群，在外周血及脾臟中，與高脂組相比，糖尿病可以顯著抑制其分化(P=0.003，p=0.026)。與糖尿病組相比，辛伐他汀組

10、外周血(P=0.17)、脾臟(P=0.86)中Ly6Clow單核細(xì)胞亞群的分化無顯著變化，但普羅布考可顯著促進(jìn)外周血（32.0±6.9％Vs14.7±11.7％，P=0.000）、脾臟（10.5±1.8％ Vs9.3±2.3％，P=0.027）中Ly6Clow單核細(xì)胞亞群的分化，且普羅布考組較辛伐他汀組更能顯著促進(jìn)外周血（32.0±6.9％Vs19.1±5.7％，P=0.000）及脾臟（10.5±1.8％ Vs9.2±1.6％，P=0.

11、015）中Ly6Clow單核細(xì)胞亞群的分化。與高脂組相比，糖尿病可以顯著升高血漿中IL-6(40.05±3.69pg/ml Vs34.69±2.71pg/ml,p=0.018)及TNF-α(13.20±1.30pg/mlVs10.23±1.62pg/ml，p=0.002)水平。與糖尿病組相比，普羅布考和辛伐他汀可以顯著降低IL-6（35.29±3.59pg/ml Vs40.05±3.69pg/ml，P=0.031;35.21±4.27p

12、g/ml Vs40.05±3.69pg/ml,P=0.042）及TNF-α(11.71±1.47pg/ml Vs13.20±1.30pg/ml,P=0.048;11.05±0.82pg/ml Vs13.20±1.30pg/ml，P=0.001)水平，但普羅布考組和辛伐他汀組外周血IL-6及TNF-α水平上無顯著差異。而且，血漿中IL-6水平與AS病變面積(r=0.752，P=0.000)、病變面積管腔百分比間呈顯著正相關(guān)(r=0.735

13、，P=0.000)，同樣，血漿中TNF-α水平與AS病變面積(r=0.472，P=0.01)、AS病變面積管腔百分比間也呈顯著正相關(guān)(r=0.601，P=0.001)。血漿中IL-6水平(r=0.515，P=0.008)、TNF-α水平(r=0.468，P=0.014)與血漿中LDL-C水平間呈顯著正相關(guān)。血漿中IL-6水平與外周血(r=0.384，P=0.04)、脾臟(r=0.420，P=0.023)中Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群呈顯著

14、正相關(guān)。同樣，血漿中TNF-α水平與外周血(r=0.517，P=0.04)、脾臟(r=0.450，P=0.014)中Ly6Cmid單核細(xì)胞亞群呈顯著正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　糖尿病可以促進(jìn)炎性單核細(xì)胞中Ly6Cmid亞群的分化、抑制抗炎性單核細(xì)胞Ly6Clow亞群的分化，加重早期AS病變。普羅布考和辛伐他汀可抑制炎性單核細(xì)胞中Ly6Cmid亞群的分化，減輕糖尿病早期AS病變。相較于辛伐他汀，普羅布考可以更大程度上的促進(jìn)抗炎性